三氯化铝对鸡脾巴细胞毒性的体外研究.pdfVIP

摘要 摘 要 以体外培养1月龄伊莎蛋雏鸡脾脏淋巴细胞为研究对象，在培养液中添加不同浓度的三 氯化铝(AICl3)，对照组添加相同体积的培养液，应用MTT比色法、放免法、半定量RT-PCR 和流式细胞术等方法观测铝对鸡脾脏淋巴细胞活性、细胞增殖、免疫细胞因子、抗氧化功能、 钙稳态及细胞凋亡等的影响，旨在探讨铝对鸡免疫细胞毒作用及其机制，为铝毒危害的解除 提供理论依据。研究结果表明： l应用台盼蓝排斥试验和MTT比色法测得染铝24h后鸡脾脏淋巴细胞的半数抑制浓度(IC50) 为0．832-4：0．01 mg／ml。 2经MTT比色法测得低剂量铝能明显抑制T细胞增殖，对B细胞增殖不起作用，高剂量铝 对T、B细胞增殖均起抑制作用。 3铝可增加淋巴细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率，导致细胞活性下降，说明铝可改变淋 巴细胞膜通透性。 4染铝组脾淋巴细胞培养液中白介素．2(IL．2)和肿瘤坏死因子(n师．a)含量低于对照组， 组间差异显著或极显著(pO．01；p0．05)，且染铝浓度和它们的含量呈负相关，提示IL．2 和n盯．a含量的减少可能是铝致免疫毒性的机理之一。 5染铝组鸡脾淋巴细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA) 含量高于对照组，超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性低于对 照组，组间差异显著或极显著(p0．01；p0．05)，且呈现剂量．效应关系。说明铝可引发 鸡脾脏淋巴细胞氧化胁迫，进而发挥其免疫细胞毒作用。 6应用流式细胞术和吖啶橙．溴化乙锭(Ao／EB)双荧光染色法分别从生化改变和形态学角度 检测了铝致鸡脾脏淋巴细胞凋亡情况。随染铝浓度的增加，淋巴细胞膜皱缩、出芽、胞浆 稀少、染色体固缩、边聚、碎裂等典型凋亡特征的细胞数逐渐增多；Go／Gl期细胞数量逐 渐增加，S和G2／M期细胞数量逐渐减少，细胞增殖指数降低；凋亡指数和细胞凋亡率升 高，染铝组与对照组间比较差异均极显著(pO．01)。表明铝可通过诱导免疫细胞凋亡发 挥免疫毒性作用。 表达减少，与对照组比，差异显著或极显著(pO．05：p0．01)。表明铝可致淋巴细胞钙 稳态失衡。 ． 关键词：铝；鸡；脾脏淋巴细胞；免疫毒性 Abstract Trichloride The EffectofAluminum Toxicity on ofChickeninVitro Splenic Lymphocyte Abstract addedtoculturesolutionof Aluminum differentconcentrationwas trichloride(AICl3)of fromchicken identicalvolumeculturesolutionWasaddedtocontrol lymphocyte splen．The group． calciumhomeostasisand The anti-oxidations，the cytoactive，cellproliferation,thecytokine，the invitroweredetectedMTT cell of cultured by colorimetric， apoptosislymphocyte