含cpg基序重质粒的构建及对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究.pdfVIP

摘 要 ODN)是一类在细菌中普遍存在的以非甲基 CpO寡核苷酸(CpColigodexynucleotides，CpO 9，TLR9)直 化cpo为核心的DNA序列。已有研究表明，其通过Toll样受体9(Toll—likereceptor 接活化B细胞、单核，巨噬细胞和树突状细胞，上调免疫刺激分子的表达，调节免疫反应，诱导 ODN 作为一种高效低毒的免疫激活剂，成为免疫学研究的热点。 bloodmononuclear 本研究在课题组筛选出的对猪外周血单核细胞(peripheral cells，PBMC)具 有最佳刺激活性的cpo基序(cpGmotif)的基础上，人工合成了含有5拷贝CpG基序的寡聚脱 氧核苷酸，并在两端设计2对酶切位点，通过定向克隆和平末端克隆将其分步串联到pcDNA3．0 10．0煳的剂量刺激猪PBMC，通过MTT比色法测定淋巴细胞的增殖能力和代谢强度进行体外淋 巴细胞转化试验。通过比较各重组质粒及同一质粒在不同剂量下对猪PBMC的刺激效果，筛选出 对猪具有最佳免疫活性的重组质粒及其剂量。结果显示，三种质粒对猪PBMC均产生了不同程度 表明pcDNAACpG一3具有最佳的免疫刺激活性，最佳剂量为5．01a9。 andmouthdisease，FMD)灭活疫苗联 500129和250p,9的pcDNAACpG一3重组质粒与O型口蹄疫(foot 健康仔猪随机分为4组，分别为生理盐水组，疫苗对照组，250肛9联合免疫组，500I．t9联合免疫组。 n～～10 与同期疫苗对照组(10 o_84)相比差异极显著(PO．01)；且在整个免疫期间，所有联合 免疫组的抗体效价均高于疫苗对照组，表明含cpG基序的重组质粒能作为一种有效的疫苗免疫佐 剂提高。型FMD灭活疫苗的体液免疫应答水平。 ODN，淋巴细胞转化，12蹄疫灭活疫苗，抗体 关键词：CpG Abstract UnmethylatedCpG efficientimmunostimulantare in oligodeoxynucleotides(ODN)withprevalent bacterial．The of ODN Toll—like abroad recognitioncop requires receptor(TLR)9，whichprovides effect activationofB anddendriticcellsin adjuvantincluding：direct cells，monocytes macrophages vitroorinvivo the of moleculesand levelsof byup—regulatingexpressioncostimulatory secretinghigh 0andIL-1 could IL-6，IL-1 2．Also，it activatematuralkillercells varietycytokines，including indirectly andT