猪流行性腹泻病部分s基因的原核表达及间接elisa检测方法的建立.pdfVIP

摘 要 猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea Epidemic 龄和不同品种的猪对本病都易感，但对哺乳仔猪的危害最为严重，以仔猪呕吐、严重腹泻 和脱水为主要临床特征。1周龄以内的哺乳仔猪于开始腹泻后2．4d死亡，致死率高达90％ 以上，给养猪业造成了严重的经济损失。目前，PED的诊断方法主要有病毒中和试验、 接ELISA法以其敏感性高、特异性强越来越受到人们的重视。 结构蛋白，是诱导机体产生中和抗体和提供黏膜免疫保护作用主要的结构蛋白。与Gen Bank上的其它毒株相比较发现S基因具有很高的保守性，所以重组S蛋白可作为理想的 检测抗原用于临床PEDV。本试验为使S蛋白在原核细胞中得以表达，针对S基因的保守 扩增出目的片段Sl基因，片段大小约为500bp。同时采用不同的载体系统，探索了S基因 的表达效果，即将猪流行性腹泻病毒的部分S基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX．6p．1 和pET-32a的Sal 包涵体提取纯化，得到纯度达90％以上的重组蛋白。Westernblot检测表明，表达的重组 蛋白能够被PEDV阳性血清所识别。由此说明，表达的重组蛋白具有良好的反应原性。 后，纯化重组蛋白