水稻cdpk家基因结构、盐胁迫下的表达特性和重要基因遗传转化.pdfVIP

摘要 CDPK是植物特有的一类丝氨酸／苏氨酸型蛋白激酶，在介导植物生育信号和逆 境信号转导中具有重要作用。迄今，有关水稻CDPK的研究尚缺乏系统报道。鉴于 此，本项研究通过对水稻基因组搜索，获得了22个水稻CDPK基因。通过现代分子 生物学和生物信息学技术，研究了上述水稻CDPK基因的结构特征、在盐分逆境胁 迫条件下的时空表达特性和部分基因启动子及基因的功能。主要研究结果如下： 全长序列、开放阅读框和翻译的氨基酸数量上变幅较大。聚类分析发现，水稻CDPK 基因可划分为2个亚组。 2、部分水稻CDPK基因在正常生长条件和盐分胁迫条件下表现为组成型表达， 在根叶中表达受到盐分胁迫的调控。OsCDPK6， 间的变化研究发现，上述基因的表达均表现为单峰曲线特征，以处理1h表达水平最 高。表明水稻许多CDPK基因介导了盐分胁迫信号的转导过程。 启动子驱动报告基因(B一葡萄糖醛酸酶基因，GUS)表达的表达载体 告基因高水平表达，且表现为叶片和茎杆维管组织优势表达的特征。研究表明，在．296 bp一-623bp和一623 bp—．989bp，具有增强子的存在；在．989bp一．1474bp中的 游基因呈维管组织中优势表达的调控元件。 4、由于OsCDPK6基因在叶片中的表达受到盐分胁迫的明显诱导，表明该基因 可能介导叶片中盐分胁迫信号的转导过程。基于此，作者通过农杆菌介导的遗传转化 法，建立了超表达OsCDPK6基因的烟草转基因系。研究发现，在盐分胁迫条件下， 上调表达OsCDPK6的转基因烟草植株，与对照相比耐盐能力明显改善。表现为经过 7d的盐分处理后，转基因系植株较对照植株伤害小、单株绿叶面积多。与对照相比， 转基因系叶片的SOD活性增加，丙二醛(MDA)含量降低；叶绿素a、b含量、类 胡萝卜素含量、可溶性糖含量和可溶蛋白含量明显增加。表明植株细胞保护代谢途径 能力中具有较重要的作用。 5、OsCDPK6在叶片中的表达表现为明显的盐分诱导特性，推测该基因的启动子 具有驱动下游基因在盐分胁迫条件下增强表达的功能，在作物耐盐转基因品种的创制 中具有重要价值。基于此，作者对OsCDPK6基因的启动子进行了克隆，采用基因遗 传转化技术，在烟草中鉴定了该启动子的功能和驱动靶基因的表达特征。研究表明， 遗传转化OsCDPK6启动子的转基因植株，根和叶进行X．glue组织化学染色的特征， 与对OsCDPK6基因在正常生长和盐分处理条件下水稻根、叶中的表达特征相一致。 盐分处理后在茎、叶的组织染色程度较对照明显加深，驱动报告基因的表达为组成型。 核心识别序列。研究表明，盐分胁迫诱导的OsCDPK6在叶片中的增强表达，可能是 通过ABA信号激活MYC和MYB或诱导上述转录因子特定组分新蛋白合成途径实 现的。 关键词：水稻；钙依赖蛋白激酶(CDPK)；基因结构；基因表达；基因功能 under Stressof Characterization，ExpressionAnalysisSalinity ProteinKinaseGenesinriceandGeneticTransformationofTw0Putative Important CDPKGenes Master candidate：WangJiao-jiao Molecularfor Yield Major：Crop BiologyHigjl kai Supervisor．Xiao Abstract Calcium．dependent AreclassifiedintoonekindofSer厂111r proteinkinases(CDPKsl