西南糯玉米地方种waxy基因表达研究.pdf

捅 要 糯玉米其糯质受隐性waxy基因控制，其特点是籽粒胚乳中的淀粉几乎全为支 链淀粉。糯玉米具有许多优良特性，品质极佳，具有很高的经济价值，是食品、纺 织、造纸、酿造、饲料等行业的重要原料。国外研究者对糯玉米突变体研究认为， 外显子中，或waxy基因内发生缺失，影响waxy基因的正确表达，而使直链淀粉合 成受阻。我国西南地区是天然Wx突变体即糯玉米遗传多样性中心，糯玉米的种质 资源极其丰富。因此，通过对西南糯玉米waxy基因表达的研究，为阐明西南糯玉 米糯质表型形成原因提供理论参考。 本研究以8份西南糯玉米地方品种、2份普通玉米自交系黄早四和478为研究 对象，从翻译水平和转录水平揭示糯玉米waxy基因表达的变化，并在DNA水平上 初步揭示引起waxy基因表达变化的原因。现将研究结果概括如下： 1．在蛋白质水平上，利用SDS．PAGE电泳分析普通玉米、糯玉米的Wx蛋白 是否存在差异。电泳结果表明，西南糯玉米胚乳中无Wx蛋白的合成或有极少量的 WX蛋白的合成；而普通玉米中有Wx蛋白的合成。序列分析表明西南糯玉米地方 品种籽粒胚乳中无、№蛋白或有极少量的Wx蛋白的原因可能是：0N,axy基因的翻 译进程受到抑制；②合成的wx蛋白，但其不能进入淀粉体或不能结合淀粉粒；③ 合成的Wx蛋白极不稳定，迅速被降解。④Wx蛋白失去活性。 2．在转录水平上，采用半定量RT-PCR和克隆技术研究糯玉米、普通玉米中Wx 基因表达是否存在差异。半定量RT-PCR结果研究表明：与普通玉米waxy相比，糯玉 米*waxy基因表达降低。这表明西南糯玉米糯质表型与waxy基因表达降低有关。对糯 玉米的ORF序列分析表明：糯玉米waxy基因不存在异常剪切或可变剪切。这表明糯玉 米中waxy基因表达与普通玉米中waxy基因表达的差异主要受转录水平的调控。Wx基 因在转运肽区域插入T3bp或9bp以及存在错义突变，该处发生的变异可能改变转运肽 的功能。在第10夕l-显子缺失了15bp，该处发生的变异可能影响Wx蛋白的活性。另外， 信号AATATG在G-ierl的研究转座子Spm．i8,发现。 3．在DNA水平上，采用克隆技术进行序列分析糯玉米waxy基因表达发生变 化的原因。分析结果表明：与普通玉米相比，糯玉米waxy基因5UTR区域是保守 box、GCbox、TATA 的，具有完整的CAAT box。在3UTR区域存在较大差异，该 处发生的变异极可能是引起糯玉米中waxy基因表达降低的主要原因，且3’UTR区 域发生的变异不同于人工选育的糯玉米自交系。在内含子上存在不同DNA片段的 插入、缺失以及单个碱基的替代；在内含子中发生变异的序列多为正向重复序列， 属于“滑脱错配”现象。 关键词：糯玉米；waxy基因；蛋白质；RNA；DNA 2 ABSTRACT The ofthe maize arecessiveWX wascontrolled glutinousendospermwaxy by gene． Thecharacterof maizeisthatstarchofkernel almost is waxy endospermamylopeetin．The excellent asbeRer waxymaize，withmany characters，suchquality,highereconomy valueandSO the rawmaterialonfood and on,isimportant industry,textile