dsrna介导沉默抑制子抗马铃薯y病毒病的研究.pdfVIP

中文摘要 本研究首先对采自安徽不同地区的感染马铃薯Y病毒(PVY)的烟草和马 铃薯病样进行病毒株系的分子鉴定。再利用dsRNA技术，构建HC．Pro基因部 分片段反向重复载体转化烟草，沉默外源侵染寄主的PVY沉默抑制子HC．Pro 基因，在RNA水平上将HC．Pro基因的mRNA降解，使其不能表达发挥作用， 从而提高转基因烟草的抗病毒RNA沉默效率。HC．Pro反向重复表达载体以农杆 菌介导转化烟草，以获得能够稳定遗传的高抗或免疫PVY的转基因烟草。 1．来自安徽不同寄主PVY分离物的血清学鉴定及其CP基因分子进化分析 采集安徽不同地区感染马铃薯Y病毒(PVY)的烟草、马铃薯和番茄病样， PvY的CP基因(PVY．CP．7)序列全长均为801nts，编码267个氨基酸。构建 PvY PVY．CP一7可能属于PvYNlN株系。 2．侵染烟草的马铃薯Y病毒(PVY)HC．Pro基因的克隆及序列分析 克隆PVY (HC．Pro．4)全长1359 基因的核苷酸序列相似性最高，达99．0％。构建PVYHC．Pro．4与其它14个PVY HC．Pro基因的系统关系树，可以看出PVY 亲缘关系最近。HC．Pro基因的克隆为进一步研究抗病毒基因工程奠定了基础。 3．马铃薯Y病毒部分辅助成分蛋白基因的反向重复植物表达载体构建 表达载体pBI—AHC-Pro(r)一In—AHC-Pro(i)。 4．反向重复表达载体以农杆菌介导转化烟草 入农杆菌EHAl05菌株中，采用叶盘法分别转化本氏烟和普通烟品种云烟85。 关键词：马铃薯Y病毒，CP蛋白，HC．Pro蛋白，反向重复表达载体，转基因抗 病毒 Il Abstract MolecularidentificationofPVYstrainsisolatedfromtobaccoand potatoplants derivedfrom Anhui which different in Provincewereconducted．Plant regions vector inverted of HC—Prowas repeatsfragments expressioncontaining partial gene theconstructionWas intotobacco constructed，and transformed to plantsproduce dsRNA．ThedsRNACansilenceHC—Pro ofPVywhichinfected the gene host，and mRNAofHC-Pro anddisenableitto degradate gene express protein．The dsRNA—mediated HC·-Pro willelevateRNA silencingsuppressorgene silencing of tobacco．Wewill inherited to