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兴奋剂的检测方法 之免疫分析法 一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法 （1）酶联免疫分析法 （2）放射免疫分析法 （3）化学发光分析法 一、兴奋剂的概念 1964年，国际运动医学会的国际兴奋剂会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的运动员使用任何异体物质，或以不正常的量和不正常的进入机体的途径使用生理物质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛成绩的行为。 兴奋剂检测的主要方法有气相色谱、高效液相色谱、气相色谱－质谱联用、液相色谱－质谱联用、免疫分析法、流动注射电化学发光、高效毛细管电泳、毛细管电泳－离子阱质谱等方法。 二、免疫分析法 免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。 特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。 分类： （1）酶联免疫分析( enzyme－linkedimmunosorbent assay，ELISA) （2）化学发光免疫分析( chemiluminescence immunoassay，CIA) （3）放射免疫分析( radioimmunoassay，RIA) 酶联免疫分析法——原理 通过在合适的载体上酶标一定量的抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点，形成抗体复合物。在一定底物参与下，复合物上的酶催化底物使其水解氧化或还原成另一种带色物质，由于酶的降解产物与显色成正比，因此可通过酶标仪来测定，从而确定是否存在未知抗原及其含量。 酶联免疫分析法——原理 酶联免疫分析法——应用1 Daniel 等用酶联免疫分析法多项检测，定性、定量检测了蛋白同化激素。这个方案结合不同的交叉反应性与分布多元数据分析技术的多元竞争ELISA实验。用新型k-最近邻分类法分析了主成分。这个方案可以同时检测四种浓度范围为0.1 - 316.2nmol/L不同的类固醇，甚至在交叉反应的前提下总的检测正确率也可达90.6%。 酶联免疫分析法——应用2 Eva M 等将牛血清白蛋白多克隆抗体与孕三烯酮3 - 羧甲基羟胺耦合，创建了两种高灵敏度、特异的检测孕三烯酮的酶联免疫分析法。实验A，半抗原蛋白涂层条件下的检测限为0.09±0.03ng.L-1。实验B，在共轭蛋白涂层的条件下，检测限可达到0.14±0.05 ng.L-1。两个免疫测试都具有高特异性，与其他合成代谢类固醇没有任何交叉反应。一般条件下的可运用于未预处理的尿液样本中类固醇的检测，回收率可达到76~122%。 酶联免疫分析法——应用2 化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类,即直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法 优点：安全，灵敏度高（10-15g/ml），稳定性好，重复性较佳，结果漂移小，线性较好，准确度高，操作方便，试剂货架期长（半年~1年），浪费少，出结果快速。 缺点：仪器价格昂贵，试剂成本较高，目前有些检测项目不能用化学发光检测，待开发。 参考文献 [1]李卫东.兴奋剂检测方法的研究进展[J]. 广州体育学院学报, 2012,32(3):38-43. [2]庞国芳, 等. 农药残留高通量检测技术[J]. 植物源产品, 2012, 12(1): 374. [3] Huihui Lu, Grainne Conneely, Mark A. Crowe, Margaret Aherne, Miloslav Pravda, George G.Guilbault. Screening for testosterone，methyltestosterone, 19- nortestosterone residues and their metabolites in bovine urine with enzymelinked immunosorbent assay ( ELISA) [J]. Analytica Chimica Acta, 2006, 570( 1): 116- 123. [4] Daniel Calvo, N
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