恙虫病东方体56kDa抗原基因片段在不同载体的表达.pdfVIP

·973· 生堡煎堡疸堂苤查!!业生!!旦箜垄鲞箜!!塑堡!i望』垦Pi!!翌i!!!堕!!!里!!!!!!!：Y!!：箜!盟!：!! ·实验研究· kDa抗原基因片段 恙虫病东方体56 在不同载体的表达 邓艳琴严延生 何似 翁育伟 陈亮 【摘要】 目的构建恙虫病东方体56kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质 粒，在E．∞髓中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果。方法从含有恙虫病 HTb 东方体Karp株sta56基因的重组克隆，扩增出不同长度的截短的sta56片段，定向插入pPROEX 及pET30a载体，转化大肠埃希菌DH5a或BL21(DE3)，IPTG诱导表达，应用十二烷基磺酸钠一聚丙烯 酰胺凝胶电泳(sDsPAGE)观察重组蛋白表达情况，应用蛋白印迹(wB)方法分析重组抗原的活性。 结果 显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白，wB证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所 识别。结论 恙虫病东方体Karp株sta56基因可在大肠埃希菌获得高效表达，pEl、30a对sta56的表 达效果优于pPROExHTb；重组蛋白具有免疫反应性，纯化后可用作免疫诊断抗原。 【关键词】恙虫病东方体；抗原；蛋白表达 oftruncated56 diffemntvectorsDENG of(hi鲫“口缸ⅣfsHgnmHs埘in Expression kDa舳tigengene Q咒抬”，0r功鼢卵GD咒fr0Z ％，z一咖，yAN％咒勘P馏，娅?Si，WE^『G阮一咣i，CHENL缸规g．蹦缸，z 口矩dP，℃t肥起f如竹。Fk：积o“35000l，China y4^f CDr，℃s加以di，zg口“￡^or：Ya咒一s矗P，zg，Email：yysh(萤publ．fz．fj．cn recombinant thetruncatedofthe Toconstruct major 【Abstract】objective plasmids∞ntaininggene sta56of strainfor inE．∞髓soasto surface antigen antigen or妇咒￡缸￡s“￡s￡‘gn优甜曲i(ot．)KarpexpresSion the indifferent FromtherecombinantTOP0一 compareexpressionemciency syStems．Methods plasmid of wml sta56 sta56of strain，severaltruncated sta56 containing or诒咒￡缸￡s甜￡5甜gHm“曲iKarp genes HTband differentlengthwereamplifiedandsubclonedintotheexpressionvectorspPROEX pET30a． in