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砂梨主要病毒的速检测及脱除技术研究
摘 要
据报道梨病毒病对我国北方梨造成了严重损失。栽培无病毒苗术是当前解决梨
病毒危害的有效途径，病毒检测是培育和繁殖无病毒苗木的重要环节。本试验以砂
病毒(ASPV)三种梨树上重要病毒的快速检测方法和对带毒样品的脱毒技术进行
了研究，取得了以下结果：
在温室，通过汁液摩擦接种用草本指示植物检测10个待检砂梨样品，其中，8
用木本指示植物对以上10个样品进行检测，其中，5个表现ACLSV症状，3个表
ASPV和ASGV采用木本指示植物检测，症状明显，结果更可靠。
白预反应后混合加入，可降低非特异反应，提高阳性样品和阴性样品的吸光度比值
和阴性反应有明显差异，较改进的PAS—ELISA灵敏。用以上方法对待检梨样品木本
材料及接种发病的草本指示植物均不能检测出ACLSV，这表明，梨样品所带的
‘
ACLSV可能与所用来源于苹果ACLSV—c的抗体血清学反应较弱。
接种的昆诺藜，均获得了约499bp的目标片段，三种方法检测结果一致，相对于
RT．PCR，前两种方法不用制备植物总核酸，简化了操作程序和要求。在此基础
可能是由以上所述ACLSV与所用抗体血清学反应较弱引起。用随机引物反转录，通
RT—PCR检测2个梨样品的ASPV得到了较弱的约316bp的目标片段。
采用茎失分离获得田间砂梨样品的4个离体苗，对复合感染ACLSV、ASGV
和ASPV的2个样品通过病毒净与茎尖培养相结合处理，采用改进的PAS—ELISA、
ACLSV，2个脱除了ASGV，1个脱除了ASPV。
综上所述，本试验建立的梨病毒ACLSV和ASGV的分子生物学检测方法相对血
清学检测结果更加稳定可靠，与指示植物检测结果基本～致，但抗体质量对IC-RT—
PCR检测效果影响较明显，对ASPV的检测还有待完善。
关键词：砂梨；ACLSV：ASGV：ASPV：指示植物；皿清学；分子生物学；检测；
脱毒
Abstract
of
in innorthChina．Thecultivation
losses
Viresdiseasesare serious pears
causing
caused
toreducethelosses viruses．111e
mosteffective
virus。freeisthe way by
pears
thesis
cultivationofvirus-fleevarieties．This
criticalinthe
isthe
viruses’detectionstep
three viruses
onthe detectionandelinfinationof
someresearch
conducted rapid major
as
madASPVin resultsaredescribed
ACLSV，ASGV Pyruspyrifolia．The
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