杨树植物组织培养要点.pptVIP

* 杨树组织培养 报告人：张文林 2015.7.16 1、培养基及外源激素的选择 2、外植体 3、分化培养 4、生根培养 5、杨树组织培养中应注意的问题 及其解决方法 杨树(Poplar)是重要的速生经济树种。扦插是杨树的传统繁殖方式，由于年龄效应，多代扦插后容易出现退化，通过脱毒复壮和杂交育种后，性状才能恢复。近年来生物技术的发展为杨树快繁和遗传改良开辟了广阔的前景。通过嫩枝、幼茎、嫩叶、叶柄、生长点和原生质体等的离体培养，可在短期内获得大量优质杨树苗木。 一.培养基及外源激素的选择 培养基的种类是影响组培苗生长的关键因素。目前，在杨树组织培养的过程中MS、1/2MS、WPM等培养基都有广泛的应用。MS与WFM培养基均属于高盐培养基，可以提供木本植物生长所需的盐类。 1、培养基的种类 张蕾等在京2杨再生体系建立的研究中提出，由于京2杨生长需要较高的营养，MS和WPM培养基明显优于GMS培养基，且MS培养基更适于腋芽的启动和生长。在35杨叶片不定芽诱导过程中，WPM培养基诱导芽迅速，芽发育正常且集中生长于切面大小叶脉处，各项指标均优于MS培养基。不同杨树的生长环境与生物学特性不同，导致适合其诱导、增殖及生根生长的培养基不同。所以，杨树组织培养时，不能片面评价培养基的优或劣。 一.培养基及外源激素的选择 2.外源激素的选择 植物组织培养过程中，外源生长调节剂是影响培养物形态建成的主要因子，细胞分裂素主要用于促进细胞分裂和由器官或愈伤组织上分化不定芽，生长素则被用于诱导细胞的分裂和根的分化。在杨树的分化培养过程中，通常选用的细胞分裂素是6-BA、ZT、 KT等，生长素为NAA。 一.培养基及外源激素的选择 康薇等对美洲黑杨叶片离体再生的研究中指出，不同细胞分裂素与0.02 mg/L NAA配合诱导叶片不定芽，其效果差异明显，0.02 mg /L 6-BA分化率为91.1%, ZT次之，KT浓度小于0. 2 mg/L时只分化出根。 。 一.培养基及外源激素的选择 Wang等在对银中杨茎段的离体再生研究中指出，采用MS为基础培养基，附加较低浓度的TDZ，采用正常光和黄光为光源，有利于银中杨茎段不定芽的分化，而采用B5为基础培养基附加较高浓度的TDZ会对不定芽的分化产生抑制。将TDZ与6 -BA配合使用效果明显优于单独使用，在新疆杨和河北杨叶片不定芽诱导的过程中添加0.25mg/L 6-BA+0.01mg/LTDZ与单独使用TDZ相比，河北杨与新疆杨叶片分化率分别增加了14.82%和25.00%。 一.培养基及外源激素的选择 陈伟纶等和诸葛强等的研究中也均发现此种现象。不同的细胞分裂素其作用机理不同，以一定比例配合使用，可以实现生物学的互补效应，有望在组织培养中产生更理想的效果 一.培养基及外源激素的选择 二、外植体 任何具有完整细胞核的植物细胞都具有细胞全能性。研究发现，与茎尖分生组织接连的组织具有较强的形态发生能力。因此，外植体选取的原则为尽量选择幼嫩的部位，外植体越幼嫩，植株越容易再生。目前，国内外研究者均采用直接采集外植体或采用截取水培或沙培后长出幼嫩部分作为外植体的方式，进行离体快繁。 1、外植体的选择 沈周高等利用中林2001杨、南林95杨和南抗杨这3种黑杨杂种的叶片作为外植体，在产生的愈伤组织上成功诱导出苗。 丁霞等诱导胡杨叶30d后产生大量丛生芽。 张春霞等对滇杨叶柄进行10 d的诱导后产生绿色芽点，30d时长出丛生芽。 二、外植体 易丽娟等利用中林美荷杨叶柄为外植体对其组织培养及植株再生进行研究并取得了成功。 朱湘渝等利用BN、N6、MS等5种培养基诱导杨树花药，也成功诱导出了杨树单倍体植株。 但于志水等在研究中指出水培苗的茎尖容易褐化，不易作为外植体。 二、外植体 从上述研究结果的诱导时间来看，茎段所需时间最短，叶片与花药所需时间较长。实践证明，杨树组织培养中，腋芽、茎尖、叶片均为较好的外植体材料。 二、外植体 2、外植体的消毒 二、外植体 在杨树无菌体系的建立中，外植体常用乙醇、次氯酸钠、氯化汞、双氧水和吐温等作为消毒剂。叶片通常先采用70%-75%乙醇处理10-60s再用HgCl2处理3-8min 或次氯酸钠处理2-10 min,茎段、茎尖和腋芽在消毒中通常选用乙醇消毒30-60s,再用滴加1-2滴叶温的HgCl2溶液处理5-15 min。 沈周高等对3种黑杨杂种叶片进行不同时长的消毒处理，结果表明，0.1%Hgcl2溶液消毒4 min为最佳处理，叶片污染率为20%，出愈率为76%。 金顺玉等利用叶片作为外植