h5亚型禽流感毒血凝素单克隆抗体的制备及夹心elisa方法的建立.pdf

中文摘要 龄RALB小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术进行脾淋巴细胞和SP2／0骨髓瘤细胞融合，经有限稀 释法筛选，得到5株能够稳定分泌抗AIVH5亚型血凝素蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为66-1、 等无交叉反应。通过免疫印迹(Westem．blm)分析显示，它们都是针对AIVH5Ⅱ型血凝素蛋白 的特异性单抗。 用纯化的AIVHA重组蛋白免疫新西兰大白兔，获得兔抗AIVH5亚型多克隆抗体，其琼扩 效价达1：16。将制备的单克隆抗体和多克隆抗体经饱和硫酸铵法粗提后再通过DEAE．纤维素柱进 一步纯化，并经PEG8000包埋浓缩，使其浓度达5m∥mL以上。用改良过碘酸钠法对以上两种 方法的建立奠定了物质基础。 以纯化的抗AIV H5咂型HA蛋白单抗作为包被抗体，以兔抗AIVH5亚型HA蛋白酶标多 抗作为第二抗体建立了用于检测H5亚型AIV的夹心ELISA方法。特异性检测表明，本实验建立 反应；与针对刚性样本的病毒分离方法相比，两者符合率达100％。 关键词：H5Ⅱ型禽流感病毒，重组血凝素蛋向，单克隆抗体，多克隆抗体，夹心ELISA Abstract is anddisease of and Avianinfluenzaaninfection wildfowl)caused syndromebirds(poultry by inaserious influenzaAvirus．Thediseasebrokein countriesoftheworld，andresulted type many a economicloss．Atthesametime，itthreatensthe health．Thus，ithasgrealpracticalimportance public to thedisease． study ofHA of H5AIVwas andinoculatedto6-8 Recombinant protein genesubtype induced，purified week-oldBALB，c the cellsand cellsof usinghybridomatechnique．SP2／0myeloma spleen mice．By theimmunizedBALB／cmicewerefusedinvitro．Fivemonoclonal obtained antibodies(McAbs)were fiveMcAbs clonedandnamed66一l、66-2、66—3、66-4、66—5。The ofthe by immunoglobulinsubtypes wereidentified chain．111eELISAtitersofasciteswerel：103．ThefiveMcAbsnot asIgGI．Kappalight to 1t5 reactedtoA1V