无选择标记遗传化体系研究.pdf

摘 要 转基因植物中的除草剂或抗生素抗性标记基因的生态环境和食用安全性一直颇有争 议，无选择标记策略提供了解决抗生素或除草剂等标记基因所引起疑虑的一种新思路。 本研究去除过程中采用位点特异性重组的方法，通过把NPI抗病基因插入到无选择标 与酶切方法结果表明了两个载体成功构建。随后利用这两个载体，开展了烟草和NL一895 杨的遗传转化研究，所得出的主要结论如下： 1．无选择标记载体pX6一GFP中可以加入目的基因，直接应用于植物的遗传转化。 2， 目的基因的插入酶切位点选择比较困难，必需使用中间载体，本文提供了一种插 ‘ 入其它目的基因的可行性思路。 3．本实验中使用的农杆菌菌种为EHAl05，属于活性比较强的菌种，转化过程中设 程中的烟草进行cef敏感性测试，结果表明，一般使用的Cef浓度为50mg，L并不 能抑制农杆菌生长，当达到150mg尼时可以很好的抑制农杆菌。 4．利用构建的表达载体在烟草的遗传转化实验中，烟草的分化率都达到100％，最后 扩增出了与质粒目的片段大小一致的条带，说明两种载