鸡传染性贫血病重组抗原间接elisa诊断试剂盒的研制.pdfVIP

鸡传染性贫血病毒重组抗原间接ELISA诊断试剂盒的研制 摘 要 infectious infectious 鸡传染性贫血(chicken anemia，CIA)是由鸡传染性贫血病毒(chicken anemia 后的一种重要的免疫抑制性疾病。目前，本病已成为世界性疾病，严重地威胁着养禽业。但在现 地，由于并发继发的病毒性、细菌性传染病或球虫病升高了ClA的死亡率．而且以后者症状更为 突出，导致临床对本病的忽视，并且因为传统CIA血清学方法中的血清中硐I试验(SN)和间接 免疫荧光试验(IFA)存在着费时、费力、对操作者技术要求高和仅适于实验室诊断的问题，因 此，急需一种快速、简便、敏感、廉价和能检测人批量样品的诊断方法川于免疫鸡群的抗体监测 和流行病学调查。 分析vpl基凶及其编码产物，预测了该蛋白的抗原表位，并对预测的其富含抗原表位的c末端基 带，J}j 臼连后转化感受态细胞，Hj BamHl鉴定为目J性者命名为pGEX．vpl(c)．得到口的克隆。 IPTG诱导， 将重组阳性质粒pGEX．vpl(c)转入表达宿主菌BL2l中，经终浓度为0．6mmol／L 成功表达了VPI C端基因．重组蛋白表达量占苗体蛋白的39．4％。经ELISA检测表明，表达的 重组蛋白能被CIAV冈1性血清识别，具有良好的抗原性。 法，井确定了最适封闭液、虽适抗原包被浓度、最适血清稀释应、血清最适作用时间、酶标抗体 晟适稀释度和最适作_LIJ时间及底物虽适显色时间。包被的重组抗原不与鸡新城疫(ND)、马立克氏 诊断方法只有良好的特异性。用该方法可检山人工攻毒后110天81％的CIAV血清抗体，表明其 具有很高的敏感性。批内重复试验，变异系数小于10％：批问重复试验。变异系数小于15％． 说明具有很好的重复性。与全病毒抗原检测结果符合率为92％以上，与进口试剂盒的符合率达97 ％。 查提供了一种快速简便的血清学方法。 关键词：鸡传染性贫血病毒， VPl基因，重组抗原，间接ELISA ofanindirectELISAKitto Development detect serawith anti-CIAVrecombinant antigen ABSTRCT Chickeninfectious causedchickeninfectiousanemia charac— anemia(CIA)is by virus(CLAY)It terizednecrosisand in tissues．aswellas ofthemarrow by depletionlymphatic bone lymphoid aplasia in chickens．CIAisan and disease and young importantimmunosuppressiVe industry treateningpoultry hasbeena disease．Howevethe diseaseis concurrentwithother cosmopol