大口黑鲈myo、mstn基因单核苷酸多态性研究及与生长相关分析.pdfVIP

上海海洋大学硕士论文 摘要 MvoD基因是生肌调节因子MRFs家族的主要成员之一，是脊椎 动物胚胎期肌肉发育的主导调控基因之一，对骨骼肌的形成和分化起 主要作用，MyoD缺失可导致成肌细胞的增值和分化无法进行。而 gro叭h最lCtorbeta，转化生长因子)超家族，其功能是抑制成肌细胞的 过度增值，是肌肉发育的负调控基因。本研究以大口黑鲈为研究对象， 旨在通过对大口黑鲈MyoD基因和MSTN基因单核苷酸多态性位点 研究及其与生长相关分析，为大口黑鲈辅助育种提供分子标记位点。 cDNA序列全长l 157bp，其中3’非编码区314bp，开放阅读框843bp， 编码280个氨基酸。采用PCR技术和基因组步移技术从大口黑鲈基 因组DNA中扩增得到MyoD基因及其5’调控区序列。该基因序列全 析。 利用PCR．SSCP技术和直接测序法分别对大口黑鲈MyoD基因 和MSTN基因进行SNP位点筛选，结果表明MyoD基因序列中存在 7个突变点，．均位于内含子上；MSTN基因序列启动子和第一外显子 上海海洋大学硕士论文 分别获得1个突变点。用获得的9个sNPs位点对大口黑鲈养殖群体 进行突变比例分析，突变范围在O．042～O．496之间。最后利用限制性 内切酶殛I和么胁1分别对启动子和外显子突变点进行PCR—I心LP 多态性检测，MSTN基因启动子和第一外显子突变位点酶切后都产生 三种基因型和两种等位基因。其中启动子突变点三种基因型之间的多 重比较结果表明：基因型AA在大口黑鲈的平均体重、全长、体长等 方面都比基因型BB要高，其中基因型AA平均体重比基因型BB的 高10．5％，这说明基因型AA对大口黑鲈的生长有一定的促进作用， 但基因型AA与基因型BB之间对大口黑鲈体重、全长和体长的影响 还未达到显著差异(PO．05)；本研究的结果暗示了MSTN基因启动 子117处AA基因型对大口黑鲈体重、全长和体长等生长性状有一定 的促进作用。 本研究的结果为进一步研究MyoD基因和MSTN基因与大口黑 鲈生长性能关系奠定了基础，尝试为大口黑鲈的育种工作提供分子标 记。 关键词：大口黑鲈；MyoD；MSTN；单核苷酸多态性；生长 上海海洋大学硕士论文 Abstract isamemberof factors an MyoD myogenic regulationfamilyplaying r01einthe of imponant Venebmteembromuscle process development． Sinceits矗mction istocontrolthe anddiflferentiatewith fon】：ling for MyoD．Myostatin，anegatiVeregulation Inuscle gene development， totheTGF—B wasto the belongs supperfaInily，its如nction d印ress ofourresearchisto myoblastp