溶藻弧菌毒力相基因的检测与保藏方法的研究.pdfVIP

溶藻弧菌毒力相关基因的检测与保藏方法的研究 摘要 溶藻弧菌对宿主的致病性与溶藻弧菌产生的各种毒力因子息息相关。本研 究以溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因(Collagenase)、碱性丝氨酸蛋白酶基因 (Alkalineserine 因(膨，)、毒力调控基因toxR以及toxS作为目的基因，采用实时荧光定量 PCR(Real．timePCR)技术对不同保藏方法其表达量进行检测。 选取实验室保存的8株溶藻弧菌为对象，提取其总RNA为模板，根据 进行传统攻毒实验，观测其致死率，分析其毒性强弱。结合两部分研究结果发 藻弧菌的毒力具有相关性；而向，．基因则与溶藻弧菌的毒力不具有相关性。 采用斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、生理盐水保藏法以及甘油液保藏 法对实验室同一株溶藻弧菌强毒株进行为期一年的保藏，再用实时荧光定量 PCR对其各毒力相关基因的表达量进行检测。分析发现，本研究所采取的四种 保藏手法都能较好的保持菌种的存活率以及遗传稳定性，其中斜面低温保藏法 效果尤为明显。另外，研究还发现铁摄取调节基因(斤f，)和毒力调控基因toxS在 不同的保藏手法下表达量始终保持相对稳定。 本论文的研究成果为探讨溶藻弧菌毒力的荧光定量PCR检测方法的应用 奠定了坚实的基础，完善