ova66蛋白原核表达及其单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

OVA66蛋白的原核表达 及其单克隆抗体的制备和鉴定 摘 要 OVA66 是本实验室应用重组cDNA 表达文库血清学分析（SEREX） 技术筛选人卵巢癌cDNA 文库得到的一种新的肿瘤相关抗原。前期实验 结果表明OVA66 呈CT 抗原的表达特点，主要表达于某些肿瘤细胞及睾 丸组织中。OVA66 基因高表达可促进肿瘤细胞的增殖，有利于细胞的侵 袭和转移。本研究着重于两方面工作：OVA66 蛋白的原核表达和抗 OVA66 单克隆抗体的制备和鉴定。 （1）表达和纯化OVA66 融合蛋白。利用本实验室已构建的pcDNA3.1 -OVA66 及含 6 ×His 的原核表达载体 pET32b(+) ，构建重组质粒 pET32b-OVA66。诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达融合蛋白 OVA66，发现 融合蛋白主要以包涵体形式存在，将包涵体变性处理，获得可溶性的融 合蛋白，经 Ni-TED 亲和层析柱纯化，然后用透析方法将融合蛋白复性 并鉴定，融合蛋白纯度可达90 ％。 （2 ）制备小鼠抗OVA66单克隆抗体并分析其生物