大肠癌相关抗原因及大肠癌相关抗原的实验研究.pdfVIP

摘要 目的：应用生物信息学对大肠癌相关抗原基因CRC—L—10的基因 结构和生物学功能进行预测，RT—PCR鉴定CRc—L一10的表达谱；应用 蛋白组学技术结合生物信息学方法鉴定、分析抗大肠癌单克隆抗体 Hb3识别的相关抗原Ca-Hb3。 方法：应用美国国家生物信息中心(NCBI)的核酸数据库，EST 数据库和相应软件分析进行生物信息学分析。提取细胞总RNA，采用 半定量RT—PCR扩增CRC—L一10，凝胶电泳后对电泳图进行灰度扫描。 提取HRT一18细胞总蛋白，经SDS—PAGE、Western blot鉴定出与Hb3 特异结合的PAGE胶条带，目的条带胰酶消化后，采用高效液相色谱 串联质谱进行鉴定。 结果：大肠癌相关基因CRC—L一10定位于15q25．2，最长开放阅 读框为579bp，编码192个氨基酸，广泛表达于许多正常组织如骨、 肝、胰、心脏等，但在皮肤癌、肾癌、胃癌、肝癌等10种肿瘤组织 中表达明显上调，而在相应正常组织中低表达。RT-PCR检测发现 CRC—L—i0在肿瘤细胞株的表达与正常细胞株比较，均无显著性差异 (PO．05)。 大肠癌相关抗原Ca-Hb3经质谱鉴定为CKAP4相似蛋白，分子