弓形虫重组抗原22的制备及应用.pdf

弓形虫蘸组抗原P22的制备及应用 摘 要 目的：应用基因豫组技术获敏感性、特异性高的弓形虫速殖予主 要表面藐艨P22蟪融合萤叁，应躅予毒影虫感染免疫学诊鼗。 方法：采用PCR方法，以弓形虫RH株DNA为横扳，扩增编码 主要表西抗艨P22鼹基遴嚣蓑。将该基溪冀段播入T!A克隆，经PCR、 双酶切和测序鉴定，获阳性克隆加以扩增，试荆盒抽提f目性克隆。双 酶切后纯化臻的片段，再将其与爨核表达载体pET-32a按一定比例在 T4连接酶的作用下蚤蛆。用PCR结合双酶切的方法鉴定，核酸测序 blot 对融合蛋白进行鉴定。将重组菌表达产物溶于尿素中，通过亲和层析 的方法得委《P22蛋巍，以分步洗涤和透橱等方法逐步洗脱尿素，楚纯 产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白。以该萤白作抗原， 与萼影虫粗抗艨癌莪检溆萼影虫感染兔盎潦和其毽各种痰燕患者血 清。 结果：i．蓑一条基嚣片段，经浏旁确歆为P22的缡码基霞。2+ 3．获重组抗原P22。4．重组抗原