鸟氨酸脱羧酶(dc)作为抗肿瘤分子靶点的基础研究.pdfVIP

中 文 摘 要 目的：克隆人和小鼠鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase ，ODC)基因，研究ODC 高表达与ODC 低表达对肿瘤细胞的生长增殖，以及对抗肿瘤药物敏感性的影响。本 研究主要是探讨ODC 作为抗肿瘤分子靶点的潜在应用价值，为肿瘤治疗提供新的途 径。 方法：(1)RT-PCR 克隆人 ODC 基因编码区，将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(-) ，构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/hODC 和 人ODC 基因反义RNA 真核 表达质粒pcDNA3.1(+)/rODC 。用pcDNA3.1(+)/rODC 分别转染HepG2 细胞和Jurkat 细胞，获得稳定低表达ODC 的细胞株。(2)RT-PCR 克隆小鼠ODC 基因编码区，构建 真核表达质粒pcDNA3.1(-)/mODC ，将其转染至小鼠黑色素瘤B16-F1 细胞，获得稳 定高表达ODC 的B16-F1 细胞。(3)MTT 法检测高表达ODC 与低表达ODC 对肿瘤细 胞生长增殖，以及对抗肿瘤药物敏感性的影响。DNA 片段化、Western blotting 检测 细胞内细胞色素 c 含量和流式细胞术检测细胞的凋亡情况以及细胞周期。(4)Balb/C 小鼠随机分组后，接种ODC 高表达的B16-F1 细胞建立荷瘤动物模型，然后观察ODC 表达水平对肿瘤生长以及小鼠的影响。 结果：(1)成功克隆人和小鼠ODC 基因编码区。获得低表达ODC 的HepG2 细胞 株(Hr1)和Jurkat 细胞株(J/o)，以及高表达ODC 的B16-F1 细胞株(B/o) 。(2)MTT 结果 表明，与对照细胞相比较，ODC 低表达能抑制HepG2 细胞和Jurkat 细胞的生长，并 且能增强该两种细胞对抗癌药物米托蒽醌和二氟甲基鸟氨酸(DFMO) 的敏感性；凋亡 分析结果显示，抗肿瘤药物更容易诱导低表达 ODC 的细胞发生凋亡；而在 B16-F1 细胞中，ODC 高表达能促进细胞的生长增殖，同时降低该细胞对抗癌药物BENS 的 敏感性，抑制BENS 诱导的B16-F1 细胞凋亡。(3)高表达ODC 的B16-F1 细胞接种小 鼠后，肿瘤的生长率和小鼠荷瘤率明显增加。 结论：在本研究所分析的肿瘤细胞中，ODC 高表达能促进肿瘤细胞的增殖、改 变细胞周期、降低瘤细胞对化疗药物的敏感性；而ODC 低表达则能抑制细胞分裂， 并使细胞对抗癌药物更加敏感。上述研究提示ODC 在肿瘤发生中的重要作用，以及 作为治疗肝癌，淋巴瘤以及黑色素瘤新分子靶点的潜在应用价值。 关键词：鸟氨酸脱羧酶 反义RNA 肿瘤 药物靶点 - II - Abstract Objective: To clone human and mouse ODC gene and to determine effects of high-expression or low-expression of ODC on the proliferation and chemosensitivity of cancer cell lines. The purpose of this study was to explore the potential value of ODC as a molecular target for anti-tumor therapy and to provide a new mean of cancer treatment. Methods: (1) cDNA coding for human ornithine decarboxylase (hODC) was cloned by Nest-RT-PCR and inserted into vector pcDNA3.1(-) to construct eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(-)/hODC and anti-sens