环介导等温扩增测孕妇血清中巨细胞病毒方法的建立及初步应用.pdfVIP

环介导等温扩增检测孕妇血清中HCMVDNA方法的建立及初步应用 中文摘要 中文摘要 人类巨细胞病毒(Hum：m 及胎儿宫内感染最常见、也是危害最大的病毒之一。它可在感染孕妇后经胎盘或 上行性感染传播给胎儿，导致流产、死胎、畸形及出生后多器官功能障碍等严重 后果。传统EUSA法的敏感性和特异性均不能满足临床要求，而荧光定量PCR 伊Q．PCR)技术也存在着对技术设备要求高，检测成本昂贵等缺点。本研究目的在 于建立一种灵敏度高、特异性强的低成本检测孕妇血清中HCMVDNA的方法并初 步评价该技术在临床应用价值。 技术建立了快速检测孕妇血清中的HCMVDNA的反应体系。该方法在HCMV的 m1基因区段设计了二对特异性引物，在BstDNA聚合酶作用下60℃恒温反应60 分钟即可完成对HcMVDNA扩增过程。扩增产物以2．5％琼脂糖凝胶电泳检测。 为确立了最佳反应条件我们对LAMP反应体系进行了优化。实验表明温度是 LAMP的最大影响因素，而镁离子和甜菜碱浓度对反应影响不大。为评价该技术 的特异性，我们使用设计的特异HCMV引物同时对HCMV、单纯疱疹病毒1型、 单纯疱疹病毒2型及人类基因组DNA进行LAMP扩增。仅HcMV