表达猪瘟兔化疫株e0蛋白的pk15细胞系构建和3′端非编码区的研究.pdf

中文摘要 本试验利用EGFP为转移载体和标志蛋白，对E0蛋白在PK．15．N胞内的表达和定位做了初步研 究，构建了能稳定表达E0蛋白的PK．1 5细胞， 一个12．nt(ttrtttctttttt)的片断，是猪瘟兔化弱毒苗区别丁石门株的标志，因此本试验选用PK．1 将HCLV株在PK．15细胞上连续传代34代，以期了解每一代病毒的增殖情况和插入标志12．nt的变 化，从而了解HCLV株在细胞上的增殖复制情况。从本试验出发，建议在疫苗生产中，尽量减少 传代次数。 1．从猪瘟病毒兔化弱毒株兔体480代后．牛睾丸细胞第3代的细胞毒中提取总RNA，以该总RNA 为模板，进行反转录，PCR扩增出了猪瘟病毒兔化弱毒株的囊膜糖蛋白EO基因，琼脂糖凝胶电 泳表明其大小与预计相符。将扩增出的E0基冈克隆到pGEMT-easy载体中，用自动序列分析仪 对其进行序列测定。将测得的序列与从GenBank中选取三株强毒株、三株弱毒株序列进行比较， 与C株的E0基因序列的同源性为98 12％。根据HCLV株的E0基因的核酸序列推导的氨基酸序 氨基酸序列的同源性为97．4％。将克隆到pGEMT-eas