afb1诱发大肝癌形成过程中差异表达基因筛选及cullin7的功能研究.pdf

AFB!诱发人鼠肝癌形成过程中差异表达基冈筛选及Cullin7的功能研究 AFBl诱发大鼠肝癌形成过程中差异表达 基因筛选及Cullin7的功能研究 摘要 肝细胞癌(hepatocellular 恶性肿瘤之一，是一种早期诊断困难、高度恶性、预后凶险的肿瘤。肝癌 的形成是一个多因素、多步骤、多基因参与的过程，传统的单因素、单基 因相关性分析难以全面准确反映肝癌复杂的病理机制，近年来随着功能基 因组学及蛋白质组学的迅猛发展，不断地推动了肝癌发生机制、诊断和治 疗等方面的研究进展。 本研究用AFBl(Aflatoxin B1，AFBl)诱发大鼠肝癌形成，以丫．谷氨 酰转肽酶(丫．glutamyl 阳性灶)为标志获取肝癌前病变的组织标本，运用基因芯片技术对大鼠肝 癌组织、肝癌前病变组织和正常肝组织的全基因组表达谱进行差异分析， 进行表达水平改变的验证，再应用RNA干扰(RNA 术对CUL7进行肿瘤相关生物学功能分析和机制探讨，以及应用实时定量 PCR和免疫组化技术观察和分析CUL7在较大样本量的人肝癌组织中的表 达及其临床意义。研究结果表明，CUL7在肝癌的发生发展过程中可能影响 细胞的增殖、凋亡能力和细胞周期的调控，它编码的蛋白是E3泛素．蛋白 连接酶复合物的组件，参与泛素依赖的蛋白质降解，CUL7在肝癌组织中高 表达。这些结果提示CUL7可能是个潜在的肝癌诊断和预后评估的分子标 志物。 ·谍题来源： 1． 广两科技厅项日，桂科攻0719： 2． 广西研究生教育创新计划，2008105981002D35。 AFBI诱发大鼠肝癌形成过程中差异表达基闪筛选及Cullin7的功能研究 研究分以下四部分进行。 第一部分 AFBl诱发大鼠肝癌发生过程中差异表达基因研究 目的：通过建立AFBl诱发大鼠肝癌实验模型，应用基因芯片技术观 察大鼠肝癌发生发展不同阶段的肝组织中基因表达谱的改变，从中筛选出 在肝癌发生过程中起重要作用的基因。 方法：4周龄的雄性近交系Wistar大鼠随机分为实验组和对照组，实验 组动物经腹腔注射AFBl诱发肝癌，对照组不予AFBl处理。分别于实验第 通过丫．GT组织化学染色并结合HE染色识别和获取肝癌前病变组织、肝癌 组织和正常对照肝组织。三种组织标本各取3例，分别提取肝组织总RNA， 然后按组织类别将3份总RNA等量混合，获得癌前、肝癌和正常三种组织 RNA。经基因芯片技术筛选出癌前、肝癌和正常三种组织差异性表达基因。 最后通过Gene 功能、生物过程、细胞组分以及生物学通路。 结果：动物实验于64周结束，结果显示实验组共有19只动物发生肝 癌，肝癌发生的最早时间为实验第51周；对照组无1例发生肝癌。1,-GT 增大，癌前组织中y-GT阳性灶总面积与肝组织切片面积比达35％～47％； 片技术筛选出组间表达水平差异基因(以表达差异≥2．0或o．5倍为限)，其 中肝癌组织与正常组织相比，有3753个上调表达基因，有3042个下调表 达基因；肝癌组织与癌前组织相比，有4885个上调表达基因，有3477个 下调表达基因，癌前组织与正常组织相比，有1027个上调表达基因，有 博一卜学位论文 AFBI诱发人鼠肝癌形成过程中差异表达皋冈筛选及Cullin7的功能研究 l 117个下调表达基因。在正常肝组织、癌前病变肝组织、肝癌组织表达依 次上调的基因30个，在正常肝组织、癌前病变肝组织、肝癌组织表达依次 下调的基因85个。 经生物信息学分析，这些差异表达基因与细胞的增生、分化，细胞周 期，细胞凋亡和细胞的信号传导密切相关。结论：通过7-GT组织化学染色 和HE染色相结合的方法有助于识别和获取大鼠肝癌前病变组织、肝癌组织 及正常肝组织；大鼠肝癌发生发展不同阶段的基因表达谱存在明显差别； 肝癌的发生发展可能与多种基因表达水平的改变有关。 关键词：AFBl，1-GT，HE，肝癌 第二部分 差异表达基因CUL7在大鼠和人肝癌组织中的表达验证 目的：对筛选出来的感兴趣基