猪细小病毒重组狂犬病毒的研究.pdfVIP

捅要 猪细小病毒(PP＼r)与伪狂犬病毒(PRY)是引起猪繁殖障碍的两个主要病原。PPV和PRV引 起的疾病在我国有很高的感染率和发病率，给我国的养猪业造成了巨大的经济损失。传统的 常规疫苗对防制PIN和PRV的感染有一定的效果，但是存在不可避免的缺陷，为了更好的控 制PIN和PRV感染，研制更加安全有效的PIN-PRY二价基因工程疫苗是解决这一问题的最好 途径。 伪狂犬病病毒基因组为一双链、线状DNA，在长约150kb的基因组上存在许多与病毒 复制无关的非必需基因，这些基因可供外源基因的插入，而使之成为活载体疫苗．以含PIN NADL-2株全部序列的GH质粒为模板，扩增了完整的PPvVP2基因和部分VPI基因，并将其 Easy载体中，构建了重组质粒pVP2．为了构建猪细小病毒和伪狂犬病毒重 连接到PGEM-T 组病毒，我们根据Anal．Ranz等报道的PINNADL一2株病毒基因组序列设计了一对包含其结 bp的DNA 构蛋白VP2基因的PCR引物，以复制型DNA为模板，通过PCR扩增出长约2．114 片段，与经StuI和SphI双酶切处理的pPRl28质粒DNA连接，转化大肠杆菌DH5a，构建 了转移重组质粒pPR．vP2。经酶切鉴定证明插入片断是VP2片断，并证明插入方向正确。 利用脂质体介导的方法，将pPR—、『P。和PRV基因组共转染于亚单层PK-15细胞，用低 熔点琼脂糖和中性红筛选重组病毒。经数次蚀斑纯化后，得到重组病毒PRV-VP2．为进一步 制备抗猪细小病毒的重组伪狂犬病毒活载体疫苗奠定了基础． 关键词：细小病毒伪狂犬病病毒VP2基因转移载体重组病毒基因工程活载体疫苗 ABSTRACT of ResearchontheRecombinantVirnsLireVaccinePseudorabies VirusandPorcineParvovirus Prof．Lu Supervisor：Prof．Liwengang zhonghua Mastercandidam：Wu fengsun Porcine two parvovims(PPV)and important pseudorabiesvirus(PRV)are swine occurrin etiologicalagents reproductivefailures,whichhigh causing prevalence andcause ininfected to economiclossestoswine greatmorbidity swine，leadinggreat conventionalvaccineshavebeenusedto PPVandPRV industry．The prevent some inviewof and infections．However,they safety possesseddisadvantages convenience．A