人脂肪来源干细培养鉴定及其向内皮细胞分化能力的研究.pdfVIP

摘要 摘要 目的：通过对人脂肪来源干细胞的提取、培养、鉴定，研究其向内皮细胞的诱 导分化能力，并检测冻存细胞复苏后的生长分化能力，为临床应用提供理论支 持和参考依据。 方法：人脂肪来源干细胞的分离参照Zuk等的方法进行。分离后的细胞接种、 培养并适时传代，每日在显微镜下观察记录其形态特点和增殖特征，并将部分 细胞冻存。消化第3代脂肪来源干细胞，利用流式细胞仪检测内皮细胞表面特 异性标志CD31。将CD31(一)的脂肪干细胞，使用不同的诱导剂向脂肪、骨分化， 分别用油红O和VonKossa染色，证明其多向分化能力，并在VEGF和bFGF诱 导下，向内皮细胞分化，分别用流式细胞仪和免疫组化的方法检测内皮细胞标 志物CD31。复苏冻存的细胞，检测其生长增殖活性和多向分化能力。 结果：从人脂肪组织中分离的脂肪干细胞在体外呈纤维样迅速生长，流式细胞 仪检测细胞表面标志CD31呈阴性，排除其为内皮细胞来源。CD31(一)的脂肪 来源干细胞可在地塞米松、胰岛素和3一异丁基-I-甲基黄嘌呤诱导下，表现脂肪 细胞特性，油红0染色见胞浆内红色脂肪液滴；在地塞米松、维生素C和13一甘 油磷酸钠诱导下表现成骨细胞特性，YonKossa染色见黑色矿化结