肿瘤抑制蛋白p53DNA结合结构域和靶基因相互作用研析.pdf

摘要 摘要 肿瘤抑制蛋白p53是一个广泛分布的磷蛋白，其具备维持基因组完整的功 能。野生型的p53主要由三个功能结构域组成：C端四聚化结构域、N端转录激 被细胞压力激活以后，作为一个转录因子进一步激活下游基因，参与包括细胞 周期调控、DNA修复、血管形成抑制、肿瘤转移抑制、细胞凋亡等生物学过程。 所有这些已知的生物学功能都依赖于其DNA结合特性。野生型的p53通过序列 发生突变，而这些突变主要发生在序列特异性的DNA结合结构域，突变的p53 不能激活下游基因转录。因此，序列特异性的DNA结合和转录激活活性是p53 最关键的生物学功能。 p53DBD的晶体结构表明：p53核心结构域结构为：一个B．三明治结构形成 脚手架，支撑两个大环和一个环．片层．螺旋模序。p53DBD上的三个半胱氨酸 子的结合被认为是p53转录激活所必需的，去除锌离子将会使p53DBD降低DNA 结合特异性。不过，镉离子、汞离子和铜离子结合p53蛋白，却导致p53构象 和DNA结合活性的破坏。不同金属离子对p53DBD蛋白截然相反的作用可以预 计：存在其他的金属离子或细胞因子能够结合并影响p53DBD。 在本论文中，我们利用荧光滴定法研究了9种金属离子与p53DBD的结合 起蛋白二级结构变化，Zn2+、M92+、Fe3+这三种离子诱导蛋白结构细微调整，而 性降低。因此，M92+和Fe3+可能是潜在的影响或调节p53活性的因子之一。 明镁离子与锌离子竞争结合p53DBD。圆二色谱分析表明镁离子结合诱导蛋白结 摘要 构发生细微的改变而不是激烈的变化。基于电泳迁移分析和荧光分析实验，我 特异性的方式不同。基于细胞内镁离子浓度相对较高并且能够影响胞内酶的活 性的事实，我们认为：镁离子是潜在的影响或调节p53转录激活活性的因子之 一。 金属离子对p53DBD结构稳定性影响研究表明：金属离子结合能增加 p53DBD的结构稳定性和热稳定性。分析丙烯酰胺淬灭实验表明：金属离子结合 p53DBD诱导蛋白结构发生变化，并且这种变化给蛋白提供一个保护作用，防止 丙烯酰胺淬灭。综合起来，我们认为：p53DBD作为一个转录因子起作用的过程 中，金属离子起到双重调节作用。金属离子不仅支持DNA结合活性，而且稳定 蛋白结构。 蛋白结合一个半位点p21启动子诱导DNA弯曲角度为23．6。。 本论文关于肿瘤抑制蛋白p53DBD与靶基因相互作用的研究，为我们认识 p53DBD蛋白与靶基因相互作用提供了更精确的单分子水平的信息，可以更深层 次地认识肿瘤细胞的发生机制，为药物研究和设计提供帮助。 关键词：p53DBD；金属离子：靶基因；亲和性；稳定性；荧光；弯曲角度 H Abstract AbStraCt Thetumor isa dis仃ibmed which suppressorprotein phosphoprotein p53 widely fIlnctionst0maintaint11e tlle consistsoftIlree p53 i11tegri妙ofgenome．Wild-够pe Rmctional C-te疵naltet砌erization N-ten】缸naI m勾or domains，me domain，me 位msactivationdomainandmecentralDNA domaill binding (p53DBD)