微孔板化学发光免疫分析法检测人血清中三碘甲状腺原氨酸.pdf

2010 年 第 55 卷 第 1 期：20 ~ 25 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 微孔板化学发光免疫分析法检测人血清中三碘 甲状腺原氨酸 ①② ② ③ ① ②* 汪阿恋 , 肖勤 , 应希堂 , 陈国南 , 林金明 ① 福州大学化学化工学院, 福州 350002; ② 清华大学化学系, 北京 100084; ③ 北京科美东雅生物技术有限公司, 北京 100094 * 联系人, E-mail: jmlin@ 2009-05-11 收稿, 2009-09-27 接受 摘要 建立了一种定量人血清中三碘甲状腺原氨酸(T ) 的化学发光免疫分析方法, 使用辣 关键词 3 根过氧化物酶(HRP)标记 T3 抗原, HRP 催化鲁米诺-过氧化氢化学发光为检测体系. 对几种 三碘甲状腺原氨酸 影响因素, 如包被抗体、酶标物的滴度进行选择, 对温育及检测时间等进行优化. 进行了方 化学发光免疫分析 法学评价: 灵敏度为0.07 ng/mL; 批内和批间变异均小于10%; 回收率在80%~90%之间; 与 辣根过氧化物酶 结构相似物 T4 及 rT3 均无明显交叉. 使用本方法与现有的发光试剂盒进行比对, 相关性良 好, 相关系数为0.9547. 甲状腺作为人体最大的内分泌腺体, 分泌的主 ANS 较为合适, 所以本实验采用ANS 将T3 从结合蛋 要活性物质有四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine, 白上解离出来从而测定血清中总T3 含量. T ), 三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine, T ), 它们对 目前检测 T 最成熟的方法是放射免疫分析法 4 3 3 于蛋白质合成、体温调节、能量产生和调节有着极为 (RIA)[7~11]. 但 RIA 方法由于试剂具有放射性, 有效 重要的作用. 甲状腺功机能失调可导致形态突变、紊 期短, 操作周期长, 检测仪器昂贵, 逐渐被其他方法 乱( 甲减或甲亢) 、炎症、恶性肿瘤等病症[1]. T 可由甲 取代. 酶联免疫分析法(ELISA)也可用来检测 T [12~14], 3 3 状腺直接分泌后释放到血液中, 但是大部分是由游 但它灵敏度低, 步骤繁琐, 易受环境干扰, 容易出现 [2] [15] 离T4 在外周组织脱去一个碘原子而释放入血 . T4 的 假阳性现象. 此外, 电化学发光免疫分析 、高效液 [16] [17] 含量是T3 含