抑制表达谷氨酰胺合成酶基因对水稻氮代谢和生长发育的影响.pdfVIP

2010 年 第 55 卷 第 10 期：875 ~ 886 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 抑制表达谷氨酰胺合成酶基因对水稻氮代谢和 生长发育的影响 蔡红梅, 肖景华, 张启发, 练兴明* 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室和植物基因研究中心, 武汉 430070 * 联系人, E-mail: xmlian@ 2009-06-11 收稿, 2009-10-10 接受 国家重点基础研究发展计划(编号: 2005CB120905)资助项目 摘要 从明恢63 平衡化cDNA 文库中获得水稻GS2 基因的cDNA 克隆, 通过基因克隆和农 关键词 杆菌介导的水稻遗传转化方法将GS2 基因导入中花11进行超量表达. 对获得的转基因植株进 谷氨酰胺合成酶 行生长表型和基因表达、生理生化指标测定与分析. 结果显示, T1 代转基因植株由于 GS2 的 抑制表达 抑制表达出现黄化现象, 生长受到限制; 叶片叶绿素含量与 GS2 基因的表达量紧密相关; 植 黄化 氮代谢 株中大多数氮代谢、叶绿素合成和光呼吸途径中相关基因表达量上升; 而植株的氮代谢水平 水稻 下降, 包括GS 活性、水溶性蛋白和氨基酸含量. [13] 高等植物氮代谢的最初同化是无机态铵离子 色等均没有显著差异 . (NH4+)经过谷氨酰胺合成酶(GS; EC )和谷氨酸 水稻是我国种植面积最为广泛的粮食作物之一, 合酶(GOGAT; EC 4, EC ) 循环(GS/ 在农业生产和发展过程中具有十分重要的地位; 它 GOGAT)转化为有机态氮谷氨酰胺(Gln), 之后形成 又是单子叶植物和农作物的模式植物, 对其进行深 各种氨基酸参与蛋白质的生物合成[1~3]. 研究认为, 入而系统的功能基因组学研究将会为作物遗传改良 GS 一般以胞质型GS1 和叶绿体型GS2 两种同工酶形 和新品种培育奠定良好的分子理论基础. 然而, 对水 式存在; GS1 由多个基因编码, 而GS2 则由单基因编 稻 GS2 基因的转基因研究仍然停留在一个表观的初 码[4]; 但也有例外, 在大豆和紫花苜蓿中克隆到多个 级阶段, 所以有必要对 GS2 转基因水稻在功能基因 基因编码GS2 蛋白[5]. GS2 蛋白是由核基因编码, 由 组学、蛋白质组学和代谢组学平台上进行更加系统、 信号肽引导进入叶绿体, 然后行使功能, 主要在叶绿 更加详细的生理生化和分子生物学研究, 以揭示 体中进行 NH4+ 的初级同化和光呼吸途径中释放NH3 GS2 基因的重要功能. 本研究以水稻为研究对象, 通 [6~10] 的再利用 . 随着GS2 基因在植物氮代谢途径中的 过转基因和多种生化与分子生物学手段对水稻 GS2 重要功能以及近年来分子生物学技术的飞速发展, 基因的功能进行详细地研究; 以 GS2 转基因植株为 GS2 的转基因研究成为国内外科研小组的重点研究 研究对象, 对其进行了生长表型、基因表达量和各种 对象. 高等植物中关于 GS2 的转基因研究已有一些 生理生化指标的测定, 揭示了 GS2 基因在水稻氮代 相关报道, 如超量表达 GS2 的转基因烟草和水稻增 谢途