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第一章 生物反应器 掌握细胞生长代谢动力学、生物反应器、相关概念与特点 生物反应器的控制与放大的方法 生物反应器的优化 了解生物反应器分类与设计 难点：生物反应动力学分析 第一节 概述 生物反应器: 培养细胞生产所需产品的装置。 自然生物、实验室设备和工业装置 提供细胞生长生活所需良好环境： ①物理环境 温度、pH、 氧浓度等 ②化学环境 营养物、 生长调节物 研究生物反应器的目的： ① 确定所需生物反应器大小和结构 ② 优化已有生物反应器 ③ 更好的了解细胞生长、代谢过程，生产效益最大化 生物反应器是生物学和化工科学的交叉，许多方法需应用化学工程的知识。如 流体传输与混合；物质传递；热量传递等 第二节 细胞生长代谢动力学 一般生物反应过程 一、细胞生长的特点、描述方法和分类 讨论反应动力学常假设生物反应在理想状态下进行，按流动特点，分两种理想流动模式： ① 全混式 反应器内各点浓度、条件完全一致 ② 活塞流式 反应器内物质沿一定方向流动，全无反向混合。 实际反应器流动特点界于这两者之间。 细胞生长的特点与群体描述 ① 多相 体系气、液、固相混合存在 ② 多组分 细胞外和细胞内各种营养成分，代谢产物 ③ 非线性 不能用线性方程准确描述 ④ 群体性 细胞培养和代谢表现为群体性活动，细胞之间互相影响。104-8个/ml，遵循普遍的生命活动规律。 基于细胞培养体系的复杂性，几乎无法对其进行描述。从工程化角度描述细胞群体，首先进行简化，然后建立物理模型，最后建立数学模型。 对细胞群体的简化，必须考虑如下2方面的因素： ⑴ 细胞内部复杂的结构 ⑵ 细胞之间的差别 因此，工程上应用最多的是非结构非离散模型——均衡生长模型。 该模型不考虑细胞内部的（组分）结构和细胞间的差异，把细胞看成一种溶质（质点），便于用浓度描述，便于数学描述 可满足大部分微生物过程及过程控制分析的需要 非结构模型不考虑细胞内部结构，每个细胞之间无差别，细胞群体作为一种溶质； 结构模型是指每个细胞之间无差别，细胞内部有多个组分存在； 一般的微生物生长动力学模型认为细胞为单一组分，在这种理想状况下建立的动力学模型称为非结构模型。由于细胞组成是复杂的，当微生物细胞内部的蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸、维生素等含量随环境条件的变化而变化时，建立起的动力学模型称为结构模型。 二、细胞浓度及浓度测量 细菌细胞浓度常用干菌质量浓度（g/L，kg/m3）描述而不是量浓度（mol/L）。所用测量方法 ⑴ 直接测量法 ① 细胞干重法 一定体积培养液中收集菌体，洗净干燥 ，称重。测出的是细胞浓度，不适用于含不溶性固体成分的培养液。最常用方法。 ②显微记数法 显微镜下用细胞计数器测定单位体积培养液内细胞个数。不能用于多细胞和丝状生物体记数，细菌培养液也难以使用，并且无法区别死和活细胞。 ③平板记数法 含细胞培养液系列稀释，取一定量稀释液涂布于平板固体培养基上培养，计算长出菌落数，在还原成原培养液的细胞浓度。测出的是活细胞数。可用于细菌、酵母等单细胞微生物或微生物孢子悬浮液，不适用丝状微物。 ④浊度法 用比色法测定，A600-700nm，快速简单，也不能区别活/死细胞，实践常用。丝状微生物可先破碎再比色，过高浓度需稀释后再比色。 ⑵ 间接测定法 测定细胞内结构成分的含量。在培养液内含较多不溶性固体物时采用，细胞成分在细胞中含量基本衡定才适用。如测DNA。RNA ，蛋白质，或者代谢产物等。 三、均衡生长模型 均衡生长模型只用一个量描述细胞含量——生物量/浓度 ，单位体积中细胞个数/干重表示。 1、细胞生长模型 细胞生长动力学曲线 测定培养过程中细胞浓度变化得到的细胞生长动力学曲线。细胞生长需经历延迟期1 ，细胞增加少，培养基浓度对其长短影响不大； 指数生长期2，细胞的生长不受限制，细胞浓度随时间呈指数生长，细胞分裂繁殖最为旺盛，生理活性最高，实践中常转接处于指数生长期中期的细胞，以保证转接后细胞能迅速生长，微生物反应能快速进行；静止期3营养物（限制性基质）耗尽，有害物大量积累，细胞浓度达最大值； 自溶期4，环境恶化，细胞开始死亡，活细胞浓度下降，细胞生长速率为负值。4个典型生长阶段。如下图。 细胞生长动力学描述 用比生长速率μ表示，比生长速率就是菌体生长速率与培养基中菌体浓度之比，μ=1dx/xdt，单位是时间的倒数h-1，m-1，s-1。表示菌体生长能力大小。描述的是单位体积内单位细胞量细胞单位时间内增加（一倍）的细胞量。培养过程中如果速率不再变化了，上式的菌体浓度变化为 X=X0exp（μt）X0为 t=0 时的菌体浓度。在对数生长期，μ是一个常数，由此计算出一段均衡生长过程中的平均生长速率， μ=1/△t lnx/X0。