线粒体功能障碍高糖刺激的小鼠足细胞凋亡中的作用机制研究.pdfVIP

中文摘要 线粒体功能障碍在高糖刺激的 小鼠足细胞凋亡中的作用机制研究 摘 要 目的：观察高糖培养的小鼠肾脏足细胞中凋亡发生的情况，探讨传 统线粒体凋亡途径在糖尿病小鼠肾脏足细胞凋亡发生中的可能作用，以 mellitus，DM)肾损伤的潜在分子机制。 便更深入的了解糖尿病(diabetes 糖尿病肾病(Diabetic 发症之一，在其发展过程中，肾脏固有细胞过度凋亡导致的细胞增殖与 凋亡关系的不平衡是肾功能恶化甚至衰竭的重要机制之一。肾小囊内层 上皮细胞，即足细胞是高度特异、终末分化的上皮细胞，是肾小球滤过 屏障的重要成分，在肾小球疾病的发生发展中发挥重要作用，从足细胞 角度重新认识肾脏疾病逐渐成为研究热点。细胞凋亡是足细胞损伤表型 改变的主要特征之一，与多种信号通路密切相关。细胞凋亡又称程序性 死亡，广泛存在于细胞生物的各种组织中，死亡受体途径和线粒体损伤 途径是两条经典凋亡途径，其中线粒体是细胞进行呼吸作用的细胞器， 是细胞能量代谢的中心，具有通过氧化磷酸化合成ATP产生能量的重要 功能，多种因素如：缺血、缺氧、氧化应激产物堆积等均可干扰线粒体 功能，促进线粒体膜通透性增加，线粒体跨膜电位难以维持，细胞色素C (Cytochrome 解酶caspase．3，导致细胞凋亡。本实验模拟糖尿病的体外环境，观察体 外培养的小鼠足细胞的凋亡情况，并通过检测线粒体膜电位以及相关凋 小鼠足细胞凋亡中的作用。 方法：常规培养小鼠足细胞(mouse 细胞经无血清培养基同步化12h后分为分成2组：正常糖对照组(NG)： 72h后收集细胞及蛋白，透射电镜观察细胞超微结构改变；TUNEL法及 流式细胞术检测细胞凋亡；流式细胞术检测线粒体跨膜电位；免疫细胞化 学和Western blot 中文摘要 C蛋白的表达变化。 检测C”ochrome 结果： 1透射电镜结果显示，正常足细胞结构清晰，可见少许微绒毛、细小 突起。高糖刺激下，足细胞绒毛及突起增多，细胞内可见大量空泡，线粒 体形态无明显改变 ‘ 2流式细胞术及TUNEL法结果均显示：高糖刺激组细胞凋亡数明显 高于对照组； tranmembrane pitentials，AqJm)明显下降； 4免疫组化结果：对照组足细胞Caspase．3有少量阳性表达，高糖刺 激后，细胞内Caspase．3蛋白表达明显增强； 5Westem blot结果：高糖刺激组CytochromeC、Caspase．3表达较正 常对照组增高。 结论：高糖刺激的足细胞线粒体膜电位明显下降，释放到胞质中的 能障碍，其相关凋亡途径可能参与了足细胞的凋亡过程，并在DN的发生 和发展中起着关键作用。 关键词：糖尿病肾病；线粒体功能障碍；足细胞；高糖；线粒体膜电 位 英文摘要 Theroleof mitochondrialin ofmouse dysfunction apoptosis glomerularpodocytesto exposedhighglucose ABSTRACT oeetive：Inorder bj to obtainthe molecular deeply