微生物基础实验技术回顾要点.ppt

* * * * 微生物的接种方法 一、斜面接种 将已长好微生物移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。 微生物的接种方法 一、斜面接种 1.两支试管呈“V”字形 2.拔下试管塞 3.火焰上微烧一周 4.接种环灼烧、冷却 5.接种、划线 6.塞上塞子，灼烧接种环 微生物的接种方法 二、液体接种 将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的方法。操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或接种环接种。 微生物的接种方法 三、穿刺接种 用接种针以无菌操作挑取少许菌体穿刺与半固体培养基中间，刺至管底，再按原途退出。穿刺时要做到手稳、动作轻巧、快速；塞紧棉塞后，放入37℃恒温培养箱内培养24小时观察结果。此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。 微生物的接种方法 四、划线接种 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。 方法： ★ 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★ 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 微生物的接种方法 四、划线接种 微生物的接种方法 四、划线接种 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 微生物的接种方法 四、划线接种 连续划线法 微生物的分离纯化 原理是将待分离的样品进行一定的稀释，使之分散，在固体培养基上形成单个菌落，再转接到适当的培养基上，就认为是纯种。 分离培养成纯种菌的方法有平板划线法、倾注平板法和动物接种分离法等，其中以平板划线法最为常用。 微生物的分离纯化 一、平板划线法 倒平板 挑取菌落 划线 注意：划线完毕，将琼脂平板培养基倒置，并在培养皿底玻璃上，用记号笔注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等，将培养皿倒置放在恒温箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下。 判定合格标准：如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 微生物的分离纯化 一、平板划线法 平板划线法的示意图 见图1：A B是最常使用的、最基本的方法，其中图B常用于含菌量较少的标本。 微生物的分离纯化 一、平板划线法 图2 分区划线法示意图 三段分区法 四段分区法 微生物的分离纯化 一、平板划线法 五段分区法 培养后情况 微生物的分离纯化 一、平板划线法  单菌落（clone 菌落（R型） 菌苔 lawn 细菌的群体形态 微生物的分离纯化 二、稀释分离法 微生物的分离纯化 二、稀释分离法 1.取无菌生理盐水（NaCl0.85% 试管三支（每支4.5ml ，编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ； 2.无菌操作取混合菌液一环于Ⅰ中，摇匀； 3.同法自Ⅰ管至Ⅱ，自Ⅱ管至Ⅲ； 4.用1ml无菌吸管，分别从Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ管中吸取0.2ml于三个无菌培养皿中，编号； 5.倒入熔化冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml左右，轻轻摇匀，待凝后倒置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时观察结果。 微生物的培养 一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称培养基。 培养基的基本成分 一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等 微生物的培养 二、培养基的种类 微生物的培养 物理状态 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 适用范围广，用于菌种的分离纯化、鉴定、活菌计数、检验杂菌、选种及菌种保藏等。 在实验室及微生物大规模的工业生产中用途广泛。 用于细菌运动状态的观察、趋化性研究、厌氧菌的培养以及细菌和酵母菌的菌种保藏等。 微生物的培养 功能 选择培养基 鉴别培养基 加富培养基 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同,其菌落通过指示剂显示不同的颜色而被区分开。 在培养基中加入有利于某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使这类微生物的增殖速度比其他微生物快。 微生物的培养 成分 合成培养基 天然培养基 复合培养基 成分精确，价格较贵，通常适用于营养、代谢、菌种鉴定或生物测定等对定量要求较高的工作中。 营养丰富，配制方便，培养效果好。但是成分不明确，实验可重复性差。 一类既有已知的化学组成物质，同时还加有某些天然成分而配置的培养基。 菌种的保藏 菌种的保藏 一、斜面低温保藏法