大鼠颌下腺细胞含IGF-I的丝素——壳聚糖支架体外复合培养的实验研究.pdfVIP

LI III qllllI II 11111I lllIIIIIIIlll 。Y1 目 录 一、 摘要 中文论著摘要…………………………………………………………1 英文论著摘要…………………………………………………………3 二、英文缩略语……………………………………………………………5 三、 论文 —1￡·—jo 月U茜”“…………………“……………”……………………………·6 实验材料………………………………………………………………7 实验方法………………………………………………………………8 实验结果………………………………………………………………1l 讨论……………………………………………………………………17 结论……………………………………………………………………18 本研究创新性的自我评价……………………………………………19 参考文献………………………………………………………………20 四、 附录 综j苤…··………………………………………………………………·22 致{射……………………………………………………………………37 个人简介………………………………………………………………38 ·中文论著摘要· 大鼠颌下腺细胞与含IGF．I的丝素一壳聚糖支架体外 复合培养的实验研究 目 的 submandibularcells scaffold)对大鼠颌下腺细胞(RatglandRSGCs)粘附、增殖、 分泌作用的影响，为进一步构建功能性的颌下腺组织提供依据。 方 法 体外组织块法原代培养1．3天龄Wistar大鼠的颌下腺细胞，免疫组织化学法 鉴定、胰酶消化法和差速贴壁法纯化、传代扩增。 采用冻干技术制作含有IGF．I的丝素一壳聚糖支架用作实验组，不含IGF．I的 丝素一壳聚糖支架用作对照组。支架的规格统一为5mmx5mmx5mm，其中用作实 验组的每个支架含IGF．I浓度为10ng／ml。 将浓度为5．0x106／ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液接种于含有IGF．I的丝 素一壳聚糖支架为实验组进行培养；将浓度为5．0x106／ml的第二代大鼠颌下腺细 胞悬浊液接种于不含IGF．I的丝素一壳聚糖支架为对照组进行培养。 于接种后的2h、4h、8h、12h、24h测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的 粘附率，免疫荧光观察细胞在支架上的粘附情况。MTT法检测接种后1d、3d、5d、 7d、9d实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况。扫描电镜观察接种后1d、3d、 5d大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构。测定1d．9d培养复合物上清液中淀 粉酶含量，检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能。采用SPSSfor windows 13．0统计分析软件对结果进行方差分析，检验水准a=O．05，PO．05有统 计学意义。 结果 l、成功将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞与含IGF．I的丝素一壳聚糖支架和不含 IGF．I的丝素一壳聚糖支架复合培养。 2、细胞粘附率检测：实验组粘附率高于对照组，2h、24h时P0．05；4h、 8h、12h时P0．05。 3、免疫荧光检测：Hoechst染色观察，RSGCs与支架复合培养2h，实验 组支架上可见细胞蓝色荧光，对照组偶见；24h时两组支架上布满蓝色细胞荧 光，实验组略多于对照组。 4、细胞增殖结果显示(MTT法)：接种后1d，实验组细胞数量略大于对照 优于对照组。 5、细胞上清液中淀粉酶含量检测：两组大鼠颌下腺细胞上清液的淀粉酶分