与肝细胞肝癌相的两个基因KIAA0101，DLK1的功能研究.pdfVIP

肝癌异常表达基因KLAA0101和DLKl的功能研究 中文摘要 DLKl的功能研究 【中文摘要】 率及死亡率增长了22％，其中肝癌无论从发病率还是死亡率来看，均为全球对人类身体 健康危害最大的癌症之一。尤其在东亚和非洲。在我国，肝癌是发病率仅次于胃癌的高 发癌症。肝癌和其它肿瘤一样是遗传和环境等诸多因素的相互作用所致，涉及大量相关 基因的结构和表达调控的改变。因此克隆，筛选和鉴定与肝癌相关的基因仍然是肝癌分 子生物学研究领域的一个前沿和重点研究课题。 寻找肝癌相关基因的首要步骤之一是得到在肝癌组织中异常表达的基因。我们实验 室运用eDNA芯片的方法获得了一批在肝癌中异常表达的已知和未知基因。对这些基因 的进一步功能研究将有助于对肝癌发病分子机理的深入了解。我们首先挑选了15个在 芯片结果显示有差异表达的基因，并扩大组织样本，运用半定量RT-PCR方法做进一步 的相关性进行较深入的研究。 癌和非小细胞肺癌中在mRNA水平上有异常表达，但在肝癌中尚无表达状态的报导。先 方法显示在8／15对样本中，癌组织表达高于相应的癌旁肝组织。利用原核表达系统表达 肝癌组织中蛋白表达比相应的癌旁肝组织低，与mRNA的表达情况相反。组织芯片免 肝癌异常表达基因KLAA0101和DLKl的功能研究 中文摘要 差异(PO．05)。我们的结果显示KIAA0101mRNA和蛋白表达水平在肝癌组织中的表 达呈负相关性。生物信息学提示KIAA0101蛋白定位于细胞内的线粒体，双重免疫荧光 的方法显示K／AAOl01可与线粒体内膜蛋白的荧光图像大部分重叠，表明蛋白大部分定 位于线粒体内，同时少数位于核内。利用线粒体特异性抗体从细胞总蛋白内富集细胞内 线粒体蛋白，运用Western 并转染肝癌细胞后，应用pMACS 达可以阻滞细胞G。期向S期的过渡从而对细胞的生长有抑制作用。我们的研究结果表 型的生物标志物的一个候选者，用于对肝癌生长速度，预后及其它生物学行为的一种参 考指标。 DLKl(deltalike 因它不具有与notch-1相结合所必需的DZL结构域，故推测它们互相之间不能结合。 DLKl与脂肪细胞的形成密切相关，高表达时能够抑制脂肪细胞的生成。DLKl是一个 父系表达的印迹基因。已经证明DLKl可以增加某些未分化神经肿瘤的恶性程度，在神 经母细胞瘤、小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤、脑瘤和血液病中高表达。另外它在血液和 肝脏的祖细胞中高表达，已经成为祖细胞的标志之一。在小鼠的实验中，RT-PCR方法 证明DLKl在胚胎肝组织中高表达而在成体肝组织不表达。在鼠胚胎肝中利用DLKl的 抗体可以分离出成肝细胞；体外培养实验中，分离得到的DLKl+肝细胞增值活性高于 blot(4／12)和Western (SMMC 7721细胞株转染筛选获得了 7721，7402和HepG2)没有检测到表达。在SMMC 高表达DLKl的稳定细胞株，同时运用腺病毒包装系统构建出含有DLKl的病毒。体外试 在不同的间隔时间作细胞周期分析。结果显示DLKl能够使细胞较快地从G。／M期过渡到 肝癌异常表达基因KLAAOl01和DLKl的功能研究 中文摘要 的增加从而加快细胞周期循环。我们进行的p34cdc2蛋白体外激酶活性试验中显示，在 达的肝癌细胞处于低分化状态，而其增值能力比较强。综上所述，DLKl在部分肝癌组织 表明可以促使肿瘤细胞生长。DLKl可能对部分肝癌的发生发展起一定的作用。 关键词：肝癌，异常表达，KIAA0101，DLKl 中图分类号：Q71 肝癌异常表达基因KLAA0101和DLKl的功能研究 英文摘要 related carcinoma andDLKf genes：KIAAOf01 [Abstract]