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紫外可见分光光度法——光的吸收定律一. Lambert-Beer 定律——光吸收基本定律　　“ Lambert-Beer 定律 ” 是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度（c）和 液层厚度 （b）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外-可见光度法定量的基础。　　Lambert定律 —— 吸收与液层厚度 （b）间的关系　　Beer 定律 —— 吸收与物质的浓度（c）间的关系　　“ Lambert-Beer 定律 ”可简述如下：　　当一束平行的单色光通过含有均匀的吸光物质的吸收池（或气体、固体）时，光的一部分被溶液吸收，一部分透过溶液，一部分被吸收池表面反射；　　设：入射光强度为 Io，吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir，则它们之间的关系应为： ??Io = Ia + It + Ir? ?? ?? ? (4) 　　若 吸收池的质量和厚度都相同，则 Ir 基本不变，在具体测定操作时 Ir 的影响可互相抵消（与吸光物质的 c及 b 无关） 　　上式可简化为：? ?? ?? ???Io= Ia + It? ?? ?? ?? ?? ?(5) 　　实验证明：当一束强度为 I0 的单色光通过浓度为 c、液层厚度为 b 的溶液时，一部分光被溶液中的吸光物质吸收后透过光的强度为??It ，则??它们之间的关系为： 称为透光率，用 T % 表示。 称为 吸光度，用 A 表示 　　则? ?? ?? ?? ?? ? A = -lgT = K · b ·c? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? (7) 　　此即? ? Lambert-Beer??定律??数学表达式。 　　 L-B 定律 可表述为：当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度 (A) 与溶液的浓度 (C) 和厚度 (b) 的乘积成正比。它是分光光度法定量分析的依据。 　　二. 吸光度的加和性 　　设 某一波长（ l ）的辐射通过几个相同厚度的不同溶液c1，c2......?cn，其透射光强度分别为?I1，?I2 ......?In，根据吸光度定义：这一吸光体系的总吸光度为 　　而 各溶液的吸光度分别为： 吸光度的和为： 即??几个（同厚度）溶液的吸光度等于各分层吸光度之和。 如果溶液中同时含有?n?中吸光物质，只要各组分之间无相互作用（不因共存而改变本身的吸光特性），则： A?=?K1C1?b1 +?K2C2?b2 + ???KnCn?bn =?A1 +?A2+ ?? +?An? ???(10) 应用：进行光度分析时，试剂或溶剂有吸收，则可由所测的总吸光度?A?中扣除，即 以试剂或溶剂为空白的依据； ? ?? ?测定多组分混合物； ? ?? ?校正干扰。 三. 吸光系数 　　Lambert-Beer??定律中的比例系数“K?”的物理意义是：吸光物质在单位浓度、单位厚度时的吸光度。 一定条件（T、?l?及溶剂）下，?K?是物质的特征常数，是定性的依据。 K?在标准曲线上为斜率，是定量的依据。常有两种表示方法： 1. 摩尔吸光系数（e）：当?c用 mol/L 、b?用 cm 为单位时，用摩尔吸光系数?e??表示，单位为 L/mol·cm ? ?? ?? ?? ?? ?? ???A?=?e?· b · c? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?(11) e?与?b及?c?无关。e?一般不超过 105 数量级，通常：?e?? 104 为强吸收；e? 102 为弱吸收；102??e?? 104 为中强吸收。 吸收系数不可能直接用 1 mol/L 浓度的吸光物质测量，一般是由较稀溶液的吸光系数换算得到。 2. 吸光系数 当?c?用 g /L ，b?用 cm 为单位时，K?用吸光系数?a?表示，单位为 L/g·cm ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?A?=?a · b · c? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ??(12) e?与?a?之间的关系为：? ??e?=?M?· a? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ???(13) e?——通常多用于研究分子结构 a ——多用于测定含量。 四. 引起偏离 Lambert-Beer??定律的因素 根据?L-B??定律，A与c的关系应是一条通过原点的直线，称为“标准曲线”。但事实上往往容易发生偏离直线的现象而引起误差，尤其是在高浓度时。导致偏离L-B定律的因素主要有： 1. 吸收定律本身的局限性 事实上，?L-B??定律是一个有限的定律，只有在稀溶液中才能成立。由于在高浓度时（通常?C? 0.01mol/L），吸收质点之间的平均距离缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布都会相互受到影响，此影响能改变它们对特定辐射的吸收能力，相互影响程度取决于C，因此，此现象可导致?A与?C?线性关系发生偏差。 此外