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2016-03-25 发布于湖北
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Osamu Yamada, Byung Rho Lee, Katsuya Gomi 引言：米曲霉由于对潮霉素等抗生素不敏感，于是在基因工程对菌株做转化前，通常引入营养缺陷型菌株做选择标记，例如niaD- ，sC-，pyrG-等。 niaD 基因功能编码硝酸盐还原酶缺乏表型不能利用硝酸盐，但能利用亚硝酸盐,看氯酸盐 sC 编码ATP硫化酶抗硒盐 pyrG 编码乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶在缺少尿嘧啶情况下不能生长，抗FOA sB 编码硫酸盐渗透酶抗硒盐，抗铬盐实验思路： niaD 300菌株（niaD-）营养分生孢子 UV 硝酸盐、亚硝酸盐、亚硝酸盐+蛋氨酸筛选 NS4（niaD-、sC-） NO3 NO2 NO2+Met niaD 300 不生长生长生长 NS4 不生长不生长生长 NS4 pUSC（含3.25kb sC基因）转化 pUN1（含5.5kb niaD基因）转化 Southern 杂交条带分析条带分析 BamHI酶切 Sal I pUN1转化的NS4 pUSC转化的NS4 8.2kb 两拷贝整合