JXOV菌株2个avrBs3pthA家族基因克隆分析.pdfVIP

核 农 学 报　 ２０１４，２８（１２）：２１６７ ～２１７４ ２１６７ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号：１０００⁃８５５１（２０１４）１２⁃２１６７⁃０８ ＪＸＯＶ菌株２个 ａｖｒＢｓ３／ｐｔｈＡ 家族基因克隆分析 夏更寿　 张　 燕 （丽水学院生态学院，浙江 丽水　 ３２３０００） 摘　 要：本研究克隆了水稻白叶枯病病原（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ，Ｘｏｏ）菌株ＪＸＯＶ 的２ 个ａｖｒＢｓ３／ ｐｔｈＡ 家族成员基因，分别命名为ｊｖａ１和ｊｖａ２。 通过氨基酸序列分析和系统发育分析、原核表达载体构建 及在水稻品种叶片接种试验，探讨其基因功能和毒性。 结果表明，Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 的氨基酸序列具有 ＡｖｒＢｓ３／ｐｔｈＡ 家族成员典型序列模式特征；ＢＬ２１（ＤＥ３）原核表达的Ｊｖａ１和Ｊｖａ２ 蛋白在ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ胶上 呈现出推测的１００ＫＤ单体蛋白大小，没有出现不依赖于植物蛋白的ＡｖｒＢｓ３ 类似的二聚体化；ｊｖａ１ 和 Ａ ｊｖａ２ 没有增强ＰＸＯ９９ 在携带不同抗性基因的１５ 个水稻品种上的毒性。ｊｖａ１和ｊｖａ２ 的基因功能有待于 进一步研究。 本研究结果为诠释水稻白叶枯病原的致病机理及相关基因家族成员的功能分化提供了重 要参考。 关键词：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ；ａｖｒＢｓ３／ｐｔｈＡ；克隆；分析 ＤＯＩ：１０１１８６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１２０１４１２．２１６７ ［１］ ［１５］ 　 　 水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）是世界性重要的粮食作物 ， 残基组成，重复数在１５ ～３３５ 之间 。 ＡｖｒＢｓ３ 中间 也是谷类生物学的模式植物［２－３］。 水稻白叶枯病 重复单元由１０２ ｂｐ 编码的３４ 个氨基酸残基组成，已 （Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｒｉｃｅ）是水稻３ 大病害之一，其病原 经克隆一些含有３４ 个氨基酸残基重复单元的ＡｖｒＢｓ３ 物为水稻黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ， 类似的成员，其重复数是５５～２５５个［１６－２０］。 重复单 Ｘｏｏ）。 Ｘｏｏ有很多不同的小种，已经报导的Ｘｏｏ小种 元的氨基酸序列高度保守，只有 １２ 和１３ 位氨基酸残 ［４］ 有３０ 多个 。 基有变化，１２ 和１３ 位氨基酸残基称为重复可变双残 与其它黄单胞属的细菌一样，水稻白叶枯病菌 基（ｒｅｐｅａｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｉ⁃ｒｅｓｉｄｕｅ，ＲＶＤ）。 ＲＶＤ 的序列决 Ｘｏｏ含有致病性所必须的Ш 型泌出系统（Ｔ３Ｓ），Ｔ３Ｓ 定了与重复单元相结合的ＤＮＡ序列特异性，即重复单 跨过细菌双层膜，很可能直接穿过植物细胞壁［５－６］。 元中这些氨基酸残基对ＲＶＤ与靶标ＤＮＡ序列之间确 细菌的效应分子蛋白通过Ｔ３Ｓ 泌出并且进入植物细 定了结合法则［２１－２２］。 最后，另外３个特征是Ｃ端的亮 ［７］ 胞 ，这些效应分子作用于不同的植物生理过程，抑 氨酸拉链（ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒ，ＬＺ）结构、３ 个核定位信号 制植物防卫反应，调节植物转录过程，增强细菌毒 （ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａ