碳水化合物分析检验.ppt

由瓷土制成，使用时先将石棉绒均覆盖在坩埚的多孔底上（约1-2毫米厚），盖以多孔瓷板，再地瓷板上均匀覆盖一层石棉绒，烘干至恒重，即可供沉淀过滤和称重之用。自玻璃过滤坩埚出现后，这种坩埚则很少应用。 2、砷钼酸比色法 原理：还原糖含有醛基和酮基，在碱性溶液中能还原铜试剂中的二价铜成一价氧化亚铜，砷钼酸试剂中六价钼被氧化亚铜还原生成钼蓝，钼蓝溶液在560nm下的吸光度与还原糖浓度呈正比例关系。按不同程序水解，从而可测出非还原糖及淀粉含量。 步骤： 绘制葡萄糖标准曲线 样品溶液制备 3、3,5-二硝基水杨酸法 原理： 在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖供热后被还原生成氨基化合物。这种呈橘红色的化合物在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系。因此，利用可利用比色法测定样品中的含糖量。 淀粉是由葡萄糖单位构成的聚合体，按聚合形式不同，可分为两种不同的淀粉分子——直链淀粉和支链淀粉。这两种淀粉分子的结构不同，性质上也有一定差异。不同来源的淀粉，其直链淀粉和支链淀粉的比例是不同的，因而也具有不同的性质和用途。 淀粉的主要性质有：a、水溶性。直链淀粉不溶于冷水，可溶于热水；支链淀粉常不溶于水，只有在加热并加压时才能溶解于水。b、醇溶性。不溶于浓度在30%以上的乙醇溶液。c、水解性。在酸或酶的作用下可以水解，最终产物是葡萄糖。d、旋光性。淀粉水溶液具有右旋性。 根据淀粉的这些理化性质，淀粉的测定方法可以分为：根据淀粉在酸或酶作用下能水解为葡萄糖，通过测定还原糖进行定量的酸水解法和酶水解法；根据淀粉具有旋光性而建立的旋光法；根据淀粉不溶于乙醇的性质而建立的酸化酒精沉淀法。 3. 试剂 (1)乙醚。 (2)淀粉酶溶液 (5g/L)：称取淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。 (3)碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀释至100mL。 (4) 乙醇 (85％)。 以下同直接滴定法测定还原糖法试剂和蔗糖测定试剂: 直接滴定法测定还原糖法试剂 (5)盐酸。 (6)碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜 (CuSO4?5H2O) 及0.05g次甲基蓝，溶入水中并稀释至1000mL。 （三）旋光法 （1）原理：淀粉具有旋光性，在一定条件下旋光度的大小与淀粉的浓度成正比。用氯化钙溶液提取淀粉，使之与其他成分分离，用氯化锡沉淀提取液中的蛋白质后，测定旋光度，即可计算出淀粉含量。 （2）使用范围及特点：本法适用于淀粉含量较高，而可溶性糖类含量很少的谷类样品，如面粉、米粉等。操作简便、快速。 （3）仪器：旋光仪，附钠光灯。 （4）测定方法 把样品研磨并通过40目以上的标准筛，称取2g样品，置于250mL烧杯中，加水10mL，搅拌使样品湿润，加入70mL氯化钙溶液盖上表面皿，在5min内加热至沸并继续加热15min。加热时随时搅拌以防样品附在烧杯壁上。如泡沫过多可加1~2滴辛醇消泡。匀速冷却后，移入100mL容量瓶中，用氯化钙溶液洗涤烧杯上附着的样品，洗液并入容量瓶中。加5mL氯化锡溶液，用氯化钙溶液定容到刻度，混匀，过滤，弃去初滤液，收集滤液装入观测管中，测定旋光度。 （5）说明与讨论 氯化钙溶液可以作为淀粉的提取剂，是因为钙能与淀粉分子上的羟基形成配合物，使淀粉与水有较高的亲和力而易溶于水中。 淀粉溶液加热后，必须迅速冷却，以防止淀粉老化，形成高度晶化的不溶性淀粉分子微束。 氯化锡溶液的作用是沉淀蛋白质，因为蛋白质也具有旋光性（左旋性）。蛋白质含量较高的样品，如高蛋白营养米粉，用旋光法测定时结果偏低，误差较大 不同来源的淀粉其比旋光度稍有差异，一般以203°计 可溶性糖类对其含量不高的谷物样品来说影响可忽略不计；但糊精的比旋光度较高，因此对结果的影响较大，用旋光法进行测定时，结果包含了糊精。 碳水化合物分析检测实例 果酒还原糖和总糖的测定 2、实验步骤 ?2.1费林溶液标定预备试验：?吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ?各?5.00?mL?于?250?mL?三角瓶中，加?50?mL?水，摇匀，在电炉上加热至沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加?2滴次甲基蓝指示液，继续滴至蓝色消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积。? 2.2费林溶液标定正式试验：?吸取费林溶液Ⅰ、Ⅱ各?5.00?mL于?250?mL三角瓶中，加?50?mL水和比预备试验少1mL的葡萄糖标准溶液，加热至沸，并保持2?min，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1?min内用葡萄糖标准溶液滴至终点