免疫学基础与应用.pptVIP

免疫学基础及常用免疫检验技术 免疫学概念 免疫是机体识别自我物质和排除异己物质的生物学反应,是动物长期进化中所形成的一种生理功能。 免疫学：研究机体自我识别和对抗原性异物排斥反应的一门科学。 抗原(antigen,Ag) 能诱导机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答中产生的抗体或效应细胞在体内外发生特异性反应的物质均称为抗原 抗体(antibody,Ab) 在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 免疫系统 人体内存在一个负责免疫功能的完整的解剖体系即免疫系统，与神经和内分泌等其他系统一样，这个系统有着自身的运行机制并可以与其他系统相互配合，相互制约，共同维持机体在生命过程中总的生理平衡。 免疫系统的组成 免疫组织与器官 中枢器官（骨髓、胸腺） 外周免疫器官（淋巴结、脾脏、黏膜淋巴组织） 免疫细胞 淋巴细胞（T、B、NK（自然杀伤细胞）） 辅助细胞（吞噬细胞、树突状细胞（DC）） 免疫分子 免疫球蛋白、补体系统、细胞因子、黏附分子、CD抗原 免疫应答 指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。 免疫应答的过程 1、识别阶段 2、活化阶段 3、效应阶段 免疫系统的功能 免疫防御（immunological defence）: 机体排斥外源性抗原异物的能力 免疫自稳（immunological homeostasis）: 机体识别和清除自身衰老残损组织、细胞的能力，是机体籍以维持正常内环境稳定的重要机制 免疫监视（immunological surveillance）: 机体杀伤和清除异常突变细胞的能力，机体籍以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长 免疫检验 免疫检验是研究免疫学技术在临床领域应用的一门科学。 免疫检验分为两部分： 利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗体、抗原、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质 利用免疫检测原理与技术检测体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白等 免疫检测结果为临床确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供了有效的实验依据。 临床免疫学 免疫性疾病 自身免疫性疾病、免疫缺陷病、免疫增殖病 移植免疫 移植后保证移植物存活，不发生排斥 移植类型 HLA抗原 肿瘤免疫 肿瘤标志物（诊断 治疗 流式细胞术） 感染免疫 感染性疾病的诊断 颗粒性抗原的获得 1.细胞抗原（红细胞） 2.细菌抗原（菌体抗原、鞭毛抗原） 3.寄生虫体抗原 如何获取抗原（二） 可溶性抗原的获取 1.体液、分泌液（血清、血浆、尿液、精液、乳汁、唾液等） 2.组织细胞培养物等 利用机械破碎法（捣碎、研磨法）、反复冻融、超声法、酶法、表面活性剂 3.分子生物学技术制备抗原 分子克隆表达蛋白质 抗体的制备（一） 多克隆抗体的制备 1.免疫动物的选择 常用家兔、绵羊、鼠、鸡、山羊、马 2.抗原接种 剂量、接种途径、间隔时间 3.采血提取抗体与纯化 4.抗体纯度鉴定 抗体的制备（二） 单克隆抗体的制备 利用杂交瘤技术筛选出杂交瘤细胞，具备永生化和能产生表位单一的抗体，将杂交瘤细胞接种小鼠腹腔或进行细胞培养，可获得大量单克隆抗体。 基因工程抗体的制备 利用分子生物学技术人为进行抗体的构建 免疫检验技术 酶免疫技术 酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。 它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性，同时又保留了酶对底物的催化活性 主要试剂: 酶标记的抗体或抗原 酶标物特点： 免疫学活性 酶对底物的催化活性 酶免疫技术-分类 酶免疫测定(Enzyme immunoassay,EIA): 用于液体标本中抗原或抗体的定性和定量 酶免疫组织化学技术：主要用于组织切片或其他标本中抗原的定位 酶免疫技术-酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验（ELISA） enzyme-linked immunosorben