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- 2016-03-30 发布于江西
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生物细胞:第二章 实验技术02.ppt
* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * PCR原理 第三节 细胞分离技术 一、离心技术 是分离细胞器及各种大分子基本手段。 转速10~25kr/min的离心机称为高速离心机。 转速25kr/min,离心力89Kg者称为超速离心机。 超速离心机的最高转速可达100000r/min,离心力超过500kg。 (一)差速离心 Differential centrifugation 特点: 介质密度均一; 速度由低向高,逐级离心。 用途:分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序:核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 Low speed High speed Differential centrifugation (二)密度梯度离心 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过离心力场的作用使细胞和细胞成分分层、分离。 类型:速度沉降、等密度沉降。 常用介质:氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 分离活细胞的介质要求: 1)能产生密度梯度,且密度高时,粘
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