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内容提要 物质的吸收光谱 分光光度法基本原理 透光率和吸光度 Lambert-Beer定律 可见分光光度法 分光光度计 测定方法 提高测量灵敏度和准确度的方法 紫外分光光度法简介 基本要求 了解光的基本性质及物质对光的选择性吸收。了解吸收光谱的意义。 掌握分光光度法的基本原理，Lambert-Berr定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数、质量吸光系数等基本概念及相互关系。 了解分光光度计的基本构造，熟悉可见分光光度法的测定方法-?标准曲线法和标准对照法，了解比吸光系数比较法和差示分光光度法。 了解提高测量灵敏度和准确度的方法。 了解紫外分光光度法的一般概念 第一节 物质的吸收光谱 一、物质对光的选择性吸收 光照射某物质，物质能够吸收光，使原有的基态转为激发态，只有当分子的能量(h?)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(?E)相等时才能被吸收。 M(基态)+ h? ??M*(激发态) 物质对光的吸收具有选择性，若溶液选择性地吸收了某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补光。 二、物质的颜色和光的波长的关系 将不同波长的单色光依次通过有色溶液，测量溶液的吸光度A(absorbance)。 以波长?为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，得吸收曲线，或称吸收光谱。 吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用?max表示。 一般，?max是定性鉴别物质的基础 。 不同浓度的溶液，?max不变，浓度与峰值成正比，这是进行定量分析的依据。 吸收光谱曲线——横坐标?；纵坐标A。 最大吸收波长——?max 。 同种物质，C不同，但?max都相同。 第二节 分光光度法基本原理 一、透光率和吸光度 入射光强度I0，吸收光强度Ia，透过光强度It， 反射光强度为Ir I0 ═ Ia + It + Ir 被测溶液和参比溶液的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为 I0 ═ Ia + It 一、透光率和吸光度 透射光的强度It与入射光强度I0之比称为透光率(transmittance)，用T表示 透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。A愈大，溶液对光的吸收愈多。 摩尔吸光系数ε是物质对某波长的光的吸收能力的量度。它表示在一定波长下测得的液层厚度为1cm,溶液浓度c为1mol/L时的稀溶液吸光度值,吸光系数与入射光波长,溶液温度,溶剂性质及吸收物质的性质等多种因素有关,当其他因素不变时,吸光系数只与吸收物质的性质有关,可作为该物质吸光能力大小的特征数据. ε越大，吸收光的能力越强，相应的分光度法测定的灵敏度就越高。ε值越大，说明电子跃迁的几率大，通常 ε＝10～105：一般认为ε＞ 104为强吸收；ε＝103～104 为较强吸收；ε＜ 102 为弱吸收，此时分光光度法不灵敏。 吸收池:用于盛试样溶液和参比溶液.玻璃或石英,厚度0.5, 1,2,5cm. 检测器:将透过吸收池的光强度转换为电讯号的装置. 信号显示系统: 影响测定结果的相对误差两个因素： T和ΔT 续前 续前 吸光度测量的条件选择： 1）测量波长的选择： 2）吸光度读数范围的选择： 3）参比溶液(空白溶液)的选择： 1．朗伯-比耳定律的物理意义是什么？写出其数学表达式。 2．摩尔吸光系数ε的物理意义是什么？其大小与哪些因素有关？ε在分析化学中有何意义？ 3．什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？ 4．显色反应如何选择？ 5．吸光度测量条件如何选择？ 6．光度分析法中，参比溶液应如何选择？ 答案 注意事项 （1）至少要有5-7个标准点，且不得随意延长。 （2）待测样品的浓度应包括在标准曲线浓度范围内。 （3）待测样品与标准溶液要在完全相同的条件下测定。 在实际工作中，有时标准曲线并不通过原点，其原因比较复杂，可能是由于：参比溶液选择不当；吸收池位置不妥；吸收池壁厚度不等或透光面不洁等；有色络合物的解离度教大，特别是在溶液中有别的络合物时，常使被测物在低浓度时显色不全，致使标准曲线低于原点等。 　 双缩脲 双缩脲反应:碱性环境　 H2O O=C C=O HN NH R-CH CH-R O=C Cu C=O HN NH R-CH