HIV检测技术教案.pptVIP

艾滋病检测技术 嘉兴市疾控中心 葛志坚 检测的重要性 任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者甚至对家庭和社会都产生十分重要的影响 艾滋病诊断的一项重要指标，也是控制HIV传播和控制艾滋病流行的重要手段 检测的目的 诊断 为确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 监测 为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群 血液筛查 为防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 临床治疗和预后的判断 疗效观察和耐药性监测 HIV感染的实验室检测 常用HIV病原学检测方法: 病毒分离 抗原检测 核酸检测（ HIV核酸定性检测、HIV- RNA定量测定） 常用HIV抗体检测方法（均未能检测N型） 筛查实验方法 ELISA，胶体金（硒）， PA 法，斑点EIA ，唾液、尿液检测卡 ，化学发光免疫分析 确认实验方法 免疫印迹法，条带免疫法， 放免法,间接免疫荧光试验 其他 CD4+/CD8+ T cell 计数等 病毒感染后病毒RNA和血清标记水平 HIV 抗 体 检 测 方 法 酶联免疫吸附法 （ELISA） 最早出现、发展最快、至今仍普遍使用 很高的灵敏度和特异性 适合对大量样品的检测 可以进行很方便的质控工作，因此是目前临床最常用的筛查检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 目前主要使用第三代抗HIV抗体1/2试剂（即双抗原夹心法） 第四代ELISA试剂可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4~9d。 HIV ELISA试剂的发展过程 第四代ELISA试剂 优点：缩短了窗口期 缺点：同时把抗原和抗体包被在反应板上，存在互相干扰的可能，检测的敏感性和特异性可能都会受到影响。第四代试剂检测p24抗原的敏感度(20～100pg/m1)，单独检测p24抗原试剂的敏感度 (3.5～10pg/m1)。 HIV感染窗口期 HIV ELISA 试剂比较 酶联免疫吸附试验（ELISA） BED- ELISA法 新近感染检测,应用于流行病学中HIV-1新发感染率监测 感染早期特异性HIV-IgG 所占比例较低，随时间其比例逐渐增大 通过测验HIV-IgG的比例的多少从而确定是否新近感染 明胶颗粒凝集试验（PA） PA是一种简便的HIV血清抗体免疫学检测方法。先将样品稀释，然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒，混匀后保温（一般为室温）。由于操作简便，无需特殊仪器设备，很适合对少量标本的检测。当血清中有HIV抗体存在时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。 PA法检测原理 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。 SFD HIV 1/2 PA的结果判读 对照粒子的反应图象为纽扣状凝集，致敏粒子的反应图象为环状凝集，则判为阳性。 无论对照粒子呈何种图象，只要致敏粒子的反应图象显示为纽扣状凝集时即判为阴性。 若对照因子反应图象为纽扣状凝集，致敏因子反应难以确定则判定为可疑。 SFD HIV 1/2 PA的结果判读 对于对照粒子和致敏粒子均显示可疑或阳性以上的样品，要在完成吸收实验的基础上进行在实验，或用其他试剂检测；结果为阳性或不确定样本，应用该试剂和其他试剂重复检测，如果仍为阳性需用蛋白印迹法确诊试验。 但由于其灵敏度和特异度不及ELISA，故不宜用于献血员和大规模常规检测。 免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。一般可在10?30min内判读结果。最大缺点是价格高，敏感度和特异度低于ELISA。 免疫胶体金（或胶体硒）快速试验基本原理（层吸法） 其基本原理是在硝酸纤维素膜上预置胶体金（或胶体硒）标记的基因重组HIV-1/2 抗原，同时分别在其下方的检测区包被基因重组HIV-1/2 抗原，对照区