第一讲植物细胞组织培养绪论技术方案.pptVIP

植物细胞组织培养 王美 山东大学生命科学院南楼南小楼104室mwang2009@sdu.edu.cn 欢 迎 各 位 同 学！ 二、 植物细胞组织培养的过程简介 离体的植物器官、组织、细胞 （外植体） 愈伤组织 丛 芽 不定根 植物体 脱分化 再分化 结果及目的 含有全部营养成分的培养基、无菌环境、一定的温度、空气、适合的PH、适时光照等 离体的植物器官、组织、细胞 获得稳定细胞培养系或 再生完整植株 培养条件 培养对象 三、 植物细胞培养的发展简史 探索阶段 Haberlandt 1902发表了以紫鸭跖草( Tradescantia )部分叶片栅栏组织的组织培养现象。仅观察到细胞的生长及细胞壁的加厚，未见细胞分裂 直到 1920 – 1930年左右，由于动物细胞培养技术的突破产生的推动，植物细胞培养技术才重新开始起步 Robbins 与Kotter于1922年分别报道离体培养根尖获得成功 Rehwald 1927以胡萝卜及其它植物为材料，使植外体免受病原物感染，并形成愈伤组织 Laibach （1929），将亚麻种间杂交幼胚体外培养成熟，证明了胚培养在植物远缘杂交的可能性 1933年，李继侗和沈同研究银杏的胚培养，将银杏胚乳提取物加入培养基 1934年，White 用番茄根建立了第一个活跃生长的无性系，使根的离体培养首次获得了真正成功；1937年，他将3种B族维生素（吡哆醇、硫胺素及烟酸）代替酵母提取物并获成功 1934年，Gautheret 发现了在挪威槭（ Acer pseudoplatanus ）形成层细胞体外的细胞分裂及生长 ，但这些愈伤组织在18个月后停止生长 该时期，吲哚乙酸（indole acetic acid； IAA ）的作用被发现。其作为植物激素，在植物细胞的分裂及愈伤组织的生长中起作用 奠基阶段 Gautheret (1939) 获得长期稳定生长的形成层植外体愈伤组织，但需要 IAA存在 而White（1939）发现，不施加IAA，粉蓝烟草（Nicotiana glauca）及美花烟草（ Nicotiana langsdorffii）的体细胞杂交细胞系也可以长期生长 以该杂交细胞诱导成的植株，也可以在生长素不存在的情况下生长 1952年，Morel和Martin通过茎尖分生组织培养获得大丽花的无毒植株 1953年，Muir将万寿菊和烟草的愈伤组织转移到液体培养基中，摇床振荡培养，获得单细胞及细胞团悬浮培养物，并继代繁殖 1955年，Miller发现激动素（Kinetin），比腺嘌呤活性高3万倍 1958年，Steward等报道在以胡萝卜韧皮部细胞培养中，形成了体细胞胚，并发育成完整植株，证实了植物细胞的全能性 Skoog and Miller (1957）利用烟草的髓组织作为植外体，检验了细胞生长素（Auxin）/细胞分裂素（Cytokinin）的比值变化对愈伤组织器官分化的影响 在生长素占优势的情况下，促进不定根的发育；细胞分裂素占优势的情况下，促进地上茎部分的发育 因此，由于在胡萝卜及烟草中取得的巨大成就，二者长期作为细胞组织培养的模式材料，直到近年才为拟南芥（ Arabidopsis thaliana ）所替代 但在该阶段的研究中，主要的研究目的是揭示不同植物组织的生理功能，推论其在植物体生命活动中的可能作用。期间，White的基本培养基（White’s basal medium）应用广泛，但培养材料多为愈伤组织。 20世纪60年底初，全合成的营养基质开始替换复杂的、自然的未知组分（如coconut milk or yeast extracts ），形成了以Murashige–Skoog medium (Murashige and Skoog 1962) 为主的培养基质, 在适用不同的要求时添加不同的培养成分。这就是著名的MS培养基 迅速发展阶段 1960年，Cocking以纤维素酶处理番茄根细胞，获得原生质体，开创了原生质体培养及体细胞杂交技术 同年，Morel利用兰花茎尖培养，实现了脱毒及快速繁殖两个目的，使兰花工业兴起 1964年，Guha及Maheshwari成功培养曼陀罗花药获得单倍体植株，促进了利用单倍体培养技术加速常规育种的开展 1967年，Bourgin及Nitsch获得烟草花药培养而来的单倍体植株 1970年，Carlson通过离体培养获得生化突变体 同年，Power等首次成功实现原生质体融合 1971年，Takebe首次利用烟草原生质体培养获得再生植株，促进了体细胞杂交技术的发展，为外源基因注入提供了理想受体材料 1972年，Carlson以原生质体融合方法获得两个烟草物种的体细胞杂种 1974年，Kao、Michayluk和Wa