分离科学---第六章色谱法解析：.ppt

凝胶色谱测定分子量分布 柱子出口需要两个检测器，一个检测组分浓度，一个检测组分分子量。 浓度检测常用紫外和示差折光检测器，而分子量检测还没有一种理想的技术可供使用。因此只得采用间接分子量检测,如淋洗体积指示器或者自动粘度计。 用淋洗体积指示器作为相对分子量检测器，是基于在给定色谱柱中，组分的淋洗体积和分子量有依赖关系。当用已知分子量的标样标定色谱柱后，就可以从淋洗体积求出试样分子量。 第六章 色谱法 6.4 超高效液相色谱 (Ultra performance liquid chromatography, UPLC) 概述 分离科学的能力随着首次成功地使用小颗粒得到惊人的分离能力而进入了一个新的时空。这个新的色谱领域，所谓超高效液相色谱（UPLCTM），与传统的HPLC技术相比提供了更高的效率，因而具有更强的分离能力。 UPLCTM的商品化，是分离科学和技术的巨大进步，液相色谱亦由此进入了全新的时代。 第六章 色谱法 2004年3月，Waters公司在匹兹堡会议上发布UPLC技术－Acquity，推出第一台商品化的超高效液相色谱系统，获得新技术金奖； 2004年7月，在ASMS上发布nanoAcquity及Q-TOF组合，专门用于蛋白表达。 第六章 色谱法 小颗粒分离的理论与科学基础 液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产品直接影响。 第六章 色谱法 Van Deemeter曲线的提示 第六章 色谱法 颗粒度越小，柱效越高 更小的颗粒度： －使得最高柱效点向高线速方向移动 －有更宽的线速范围，增加分离速度 要求仪器在超出目前限度（6000psi/400bar）的压力下工作 要求仪器系统体积要更小 检测器能高速检测出峰宽只有几秒的色谱峰。 第六章 色谱法 Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色谱系统的设计，充分利用了小颗粒的所有优点，弥补传统HPLC系统的不足。 由于把全局设计思路用于所有集成的部件，包括从进样到数据采集——Waters UPLCTM系统展示了一种设计理念，在当今市场上给分离科学赋予了新的含义。 第六章 色谱法 创新的颗粒合成技术，硬件及填装过程 －1.7?m的颗粒度 为传质作用所优化的孔体积及孔径 新的桥式杂化颗粒专利技术，具有耐压及极为优秀的色谱性能 创新的颗粒合成及筛分技术使颗粒度分布非常窄 －色谱柱硬件 为保留更小的颗粒新型筛板技术 新型的柱接头技术适应更高的耐压和更低的扩散 －装填技术 新型超高压装填技术使得柱床更加稳定，有更长的柱寿命 第六章 色谱法 Waters新技术的实现 －高压溶剂输送单元 两溶剂管理系统，高达15000psi耐压 －完善的系统设计 整个系统体积小于150?L，包括20?L的Loop、50?L的梯度混合器体积、500nL的检测池体积 新型自动进样器，降低实验周期，减少样品交叉污染 高速检测器，采样速率40点/秒 第六章 色谱法 Acquity UPLCTM的优势 － UPLCTM所展示的优势 样品通量增加9倍 灵敏度增加3倍 分离度增加2倍 －数据质量提高 －生产力提高 分析速度加快 －色谱峰容量增加 单位时间内能分离样品的能力增加 第六章 色谱法 超高分离度 分离度方程: Rs ? N1/2 Van Deemter色谱理论: N与颗粒度(dp)成反比 ACQUITY UPLCTM系统: 1.7μm颗粒提供的柱效比5μm颗粒提高了3倍 1.7μm颗粒的分离度比5μm颗粒提高了70％ 第六章 色谱法 峰容量增加 第六章 色谱法 超高速度（高通量） 高通量要求在单位时间内提供更多的信息和处理更多的样品并保证提供高质量的数据。 较小的颗粒能超乎寻常地提高分析速度而不降低分离度。 dp减小后，柱长可以按比例缩短而保持柱效不变 N ∝L/dp Van Deemter理论:最佳流速与粒度成反比 流量∝1/dp 第六章 色谱法 ACQUITY UPLCTM系统用1.7 μm颗粒，与普通5μm颗粒相比： 柱长缩短3倍而保持柱效不变 分离在高3倍的流速下进行分离度保持不变，结果使分离过程快了9倍。 第六章