选修1专题53血红蛋白的提取和分离.docVIP

选修1 专题5 .3 血红蛋白的提取和分离 编写：*** 审核：*** 使用时间：2012-4 姓名 班级 学号 评价 一、学习目标 1.尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 二、学习重点、难点 1.凝胶色谱法的原理和方法。 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 1.1 红细胞的洗涤： （1）取材：选用哺乳动物的血液来分离血红蛋白。 （2）目的：去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化 1.2 血红蛋白的释放： （1）目的：使红细胞破裂，释放血红蛋白 （2）过程： 1.3 分离血红蛋白溶液： （1）目的：经离心使血红蛋白与其它杂质分离，便于下一步纯化。 （2）过程：将搅拌好的混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min。 （3）结果：试管中溶液分为4层： 1.4 分离： 用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层， 分液漏斗中静置片刻，分出下层的红色透明液体。 2、粗分离——透析 2.1 目的：除去样品中分子量较小的杂质。 2.2 原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。 2.3 方法：取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH7.0），透析12小时。 3、纯化 3.1 目的：通过凝胶色谱法将相对分子量较大的杂质蛋白质除去。 3.2 凝胶色谱操作 3.2.1 凝胶色谱柱的制作： 3.2.2凝胶色谱柱的装填 3.2.3样品加入与洗脱 4、纯度鉴定： ——通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定所提取血红蛋白的纯度。 【自我诊断】 1．凝胶色谱法可以有效的分离蛋白质的根据是（ ） A．分子的大小 B．相对分子质量的大小 C．带电荷的多少 D．溶解度 2．利用凝胶色谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是（ ） A．相对分子质量大的 B．溶解度高的 C．相对分子质量小的 D．所带电荷多的 3. 凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（ ） A. 多糖类化合物 B. 脂质 C. 蛋白质 D. 核酸 4．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 ( ) 5．能进入凝胶内部通道的蛋白质是指 ( ) A．相对分子质量大的 B．吸附性高的 C．相对分子质量小的 D．溶解度低的 6．用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( ) A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 四、小组合作学习、教师引导、归纳、总结 （一）讨论题 ： 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？ 2、与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质得分离有什么意义？ 3、课堂总结（填空） 五、巩固练习 （一）选择题 7．使用SDS一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于 ( ) A．电荷的多少 B．分子的大小 C．肽链的多少 D．分子形状的差异 8．缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的 ( ) A．温度 B．pH C．渗透压 D．氧气浓度 9．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 ( ) A．NaCI B．甲苯 C．蒸馏水　　　　D．柠檬酸钠 10．蛋白质提取和分离分为哪几步 ( ) A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 11. 血红蛋白因含有什么物质而呈红色 ( ) A. O2 B. CO C. CO2 D.血红素 12. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第三层是（ ） A. 甲苯 B. 血红蛋白溶液 C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀 13．洗涤红细胞的目的是 ( ) A．去除血清 B．去除杂蛋白 C．除去血小板 D．除去水 14．