环境工程微生物实验.docVIP

第一章 微生物学实验常识 第一节 微生物实验操作常识 环境工程微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时，通过实验，培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力以及实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。 一、实验过程中注意事项 1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。 2．认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。 3．实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 4．实验时细心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌液试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。 5．实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，先关掉火源，再用湿布或砂土掩盖灭火，必要时用灭火器。 6．使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放会原处。 7．每次实验完毕后，必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖其上半小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前须先消毒（浸泡在3%来苏尔液中）。 8．每次实验须进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。 9．每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告内容中，力求简明准确，及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净，注意关闭门窗，灯、火、煤气等。 二、接种室 在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，由于许多尘埃和杂菌，对接种工作干扰很大，很易污染。因此，接种工作要在空气经过灭菌的环境里进行，小规模的可利用接种箱，大规模的则在接种室里操作，也可在超净工作台中操作。 （一）接种室内设备和用具 接种室内的工作台，不论是什么台面，都要求表面光滑和水平。光滑是便于用消毒药剂擦洗；水平是在倒琼脂平板时可以保证培养皿内平板的厚度一致。 在接种室（或超净工作台）安装一个紫光灯。接种室内的紫光灯，可吊在经常工作的座位的正上方。 缓冲室内应有专用的工作服、鞋、口罩、盛有来苏儿水的瓷瓶和毛巾、手持喷雾器和5％石炭酸溶液等。 接种室内有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70％的酒精棉球、工业酒精、载玻片、记录本、标签纸、废物筐等。 （二）接种室的灭菌消毒 1．熏蒸灭菌：接种室使用时间较长，污染比较严重，应进行熏蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺熏蒸。熏蒸前应将接种室清扫干净，打开通气窗通风干燥。这是接种室彻底灭菌的措施。 2．石炭酸喷雾：在每次接种前，用5％石炭酸喷雾，可促使空气中微粒及杂菌沉降，防止桌面、地面上微尘飞场，并有杀菌作用。 3．紫外线照射：有条件时在每次接种前，应开启紫外线灯，照射半小时以上（一般不必超过一小时），有较好的杀菌效果。 （三）接种室工作程序 1．每次使用前半小时，接种室和缓冲室内用5％石炭酸喷雾。有紫外线灯时可照射半小时。 2．用肥皂洗手。把所需器材搬入缓冲室。换上经常灭菌的工作服、工作帽和工作鞋（旧的衣帽鞋洗干净后灭菌即可），戴好口罩，然后用2％煤酚皂液将手浸洗2min。 3．将各种需用物品般进接种室，按一定位置放好。检查是否齐备。用5％石炭酸重点在工作台面上方和附近地面上喷雾，然后退回隔离室，稍停几分钟，再进接种室工作。 4．接种操作前用70%酒精棉球擦手，进行无菌操作时，要严格认真，动作要轻缓，尽量减少空气波动，如二人操作，要相互配合好。工作时用完的火柴、废纸等，不要仍在地上，应丢道废物桶内。 5．工作结束后，立即将台面收拾干净，将不应在接种室存放的物品和废弃物全部拿出接种室，然后用5%石炭酸全面喷射，开紫外线灯照射半小时。 6．工作中应主要安全。如遇棉塞着火，用手紧握即可熄火，如来不及时，应用湿布扑灭，切勿用嘴吹，以免扩大燃烧；如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时，应用抹布沾5％石炭酸收拾到废物桶内并擦拭台面或地面，用酒精棉球擦手后再继续操作。 （四）接种室空气污染情况的检验 接种室应定期进行空气污染情况的检验，其目的是了解接种室灭菌效果，另外是了解在操作过程中操作行动对空气的污染影响，以便有的放矢地及时改进灭菌措施和操作方法。 1．检验方法 （1）平板检验法：用培养微生物主要类群的常规培养基，如肉汤琼脂、淀粉琼脂、土豆琼脂，分别倒成平板，每种两个，都放