分光光度计的使用资料.ppt

ALEX 分光光度计的使用与波长检测 分光光度计：指能够从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。 紫外分光光度计:200～400nm 可见光分光光度计:400～760nm 红外分光光度计:760nm 全波段分光光度计 掌握722分光光度计的正确使用方法 熟悉分光光度计的原理、结构和波长检测方法 了解紫外分光光度计和可见分光光度计物质检测的特点 目 的 要 求 准直 透镜 放大器 光源 反射镜 狭缝 保护 玻璃 棱镜 比色池 聚光透镜 光电管暗盒 光电管 光门 聚光 透镜 仪器光学系统 光源： 可见光区：钨灯，卤钨灯(320 ～ 2500 nm) 紫外区： 氢灯，氘灯(180 ～ 375 nm) 光源 单色器 吸收池 检测器 显示系统 仪器的基本结构 单色器： ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②色散元件：将复合光分解成单色光，棱镜或光栅； ③准直镜：透镜或反射镜使入射光成为平行光束； ④出射狭缝：单色光聚焦至出射狭缝； 依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 玻璃350 ～ 3200 nm, 石英185 ～ 4000 nm 入射狭缝 准直镜 棱镜 聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 800 600 500 400 棱镜单色器的结构原理示意图 棱镜 光栅： 在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 M1 M2 出射狭缝 光屏 透镜 平面透射光栅 光栅衍射示意图 原理： 利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光. 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便 吸收池： 玻璃(G) — 能吸收UV光，仅适用于可见光区。 石英(Q) — 吸收紫外光，适用于紫外和可见光区。 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）。 检测器 直流放大器 h? 光敏阴极 阳极 90V直流电源 高电阻 光电管检测示意图 把光信号转换为电信号的装置，又称为光电转换器（光电管、光电倍增管、光电二极管阵列 ）。 显示系统 紫外-可见分光光度计，是依据物质在不同光区吸收光谱的特性，根据光吸收定律即朗伯--比尔定律，对物质进行定性鉴别和定量分析的仪器。 A=kLc A— 吸光度(absorbance) L— 介质厚度(length/cm) c— 浓度(concentration) K— 吸光系数(absorptivity) 工作原理 朗伯-比尔定律的适用条件： 入射光为单色光。 溶液是稀溶液。 适用于分子吸收和原子吸收。 朗伯-比尔定律:表达了物质对单色光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系. 朗伯-比尔定律的应用 ③根据下述公式求得浓度. ②测定测定管的吸光度值 ①找出该溶液的?max 测定方法（摩尔吸光系数法） c=A/kL 朗伯-比尔定律的应用 ③根据下述公式求得浓度. ②同时测定标准管和测定管的吸光度值 ①找出该溶液的?max 测定方法（标准管法） 标准管的吸光度值 标准管的浓度值 测定管的吸光度值 测定管的浓度值 = 朗伯-比尔定律的应用 0 1 2 3 4 C(mg/ml) A 。 。 。 。 。 * 0.8 0.6 0.4 0.2 0 ③求得浓度. ②做A-c工作曲线. ①找出该溶液的?max 测定方法（标准曲线法） 722分光光度计 镨钕滤光片 实 验 器 材 一、722分光光度计的正确使用 1.接通电源，打开仪器开关，预热25min； 2.打开样品室盖，将装参比溶液的比色皿放入比色皿架中,在测定波长将透射比T调到0%。关闭样品室盖，将透射比T调到100%。 操作步骤 3. 重复3次打开、合上比色皿暗盒盖，反复调整透射率“0”和“100％”，选择A测量方式。 4. 将装有待测溶液的比色皿放入比色皿架中,盖上比色盖暗盒，推入光路，读出吸光度。 5. 每次改变一次波长进行测量时，必须重新校正透光率“0”和“100％”. 波长检测时使用镨钕滤光片来做标准。本仪器镨钕滤光片是粉红色的，实际波长为529nm、741nm。将镨钕滤光片装到仪器的比色皿座中，空白为空气，待仪器稳定后进行以下步骤： 操作步骤 一、722分光光度计波长检测 1.打开比色皿盖子，调节透射比为“0” ； 2.将比色皿盖合上，使光电管受光，将透射比调 “100％” ，反复3次调整透光率“0”和 “100％”； 3.将镨钕滤光片置于光路中，然后根据表12-1、 12-2完成测试； 4.每变一次波长必须重新校对“0”和 “100％”，找出 透射比最小的波长即最大吸收波长。 1．开机预热后才能使用 ； 2．测试过程每次改