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显微镜的原理和应用概况 显微镜的分类 传统光学显微镜 电子显微镜 扫描探针显微镜 Robert hook Cells 光学显微镜的构造 当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在像方二倍焦距以外形成放大的倒立实像 光学显微镜的成像原理 光学显微镜的成像原理 当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚像。 色差 球差 光学显微镜的缺陷 显微镜的重要光学技术参数 数值孔径 数值孔径（NA）是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（η）和孔径角（u）半数的正玄之乘积 ，主要反映消除色差的能力。 NA=ηsinu/2 溴萘的折射率为1.66 分辨率 显微镜的分辨率用公式表示为： d=0.61λ/NA 式中d为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。 1． 降低波长λ值，使用短波长光源。 2．增大介质η值和提高NA值（NA=ηsinu/2） ? 3．增加明暗反差。 照明方案 －－丁道尔现象与光的干涉 放大率 目镜×物镜 受数值孔径的制约，并非越大越好。 焦深 看得清楚部分的厚度就是焦深。 1．焦深与总放大倍数及物镜的数值孔镜成反比。 　 2．焦深大，分辨率降低。 　由于低倍物镜的景深较大，所以在低倍物镜照相时造成困难。 倒置相差显微镜 荧光显微镜 激光共聚焦显微镜系统 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰； 激光束逐点扫描，标本上的被照射点，在探测针孔处成像，由探测针孔后的光点倍增管（PMT）或冷电耦器件（cCCD）逐点或逐线接收； 焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面，克服了普通显微镜图像模糊的缺点。 激光共聚焦显微镜系统 电子显微镜 1 电子束可以产生图像 2 电子束的波长远小于可见光（0.1nm/200nm)，从而有更高的分辨率 透射电镜 电子透过薄切片时产生部分扩散 只有穿透的电子可显示图像 电子不能穿透厚的样本，而全部扩散，体现为暗影 透射电镜 透射电镜下的胰腺细胞 标本制作应非常薄，主要用于观察亚细胞结构 扫描电镜 通过电子的反射而产生图像 可反应物体表面的立体结构 Ant Mite 扫描探针显微镜－原子力显微镜 其他：如磁力显微镜，与光学显微镜有本质不同 e- e- e- e- e- e- e- e- e- 1nm 扫描方式：接触式－－原子力 非接触式－－范德华力 敲击式 显微镜应用参考 分辨率 图像特点 标本要求 使用价格 地点 普通显微镜 差或一般 无 基本无；可活体 零 几乎所有实验室 荧光显微镜 一般 可仅观测荧光，背景清晰 有自发或激发荧光；可活体 5-10元/小时 院中心实验室；烧伤实验室 激光共聚焦显微镜 一般 可三维构建；逐层扫描 有自发或激发荧光；可活体 150元/小时 院中心实验室；校中心实验室 电子显微镜 高 透射与扫描各有特点；单色 前处理复杂，真空观察 250元/标本 校中心实验室 原子力显微镜 极高 物体表面构象把握强；单色 可于空气中观察 微生物教研室拟购买； 谢谢！