沙门氏菌的检测鉴定教案分析.pptVIP

沙门氏菌的检测及鉴定 杨淑霞 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂。 3.5 HE琼脂：见附录A中A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂。 3.7 沙门氏菌属显色培养基。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂。 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）。 3.11 氰化钾 （KCN） 培养基。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基。 3.13 糖发酵管。 3.14 邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基。 3.15 半固体琼脂。 3.16 丙二酸钠培养基。 3.17 沙门氏菌O和H诊断血清。 3.18 生化鉴定试剂盒。 4 检验程序 5 操作步骤 5.1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL无菌NaOH或HCl调pH 至6.8±0.2。 无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。 如为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过15 min,或2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻 5.2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42℃±1 ℃培养18 h～24 h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 * 模板来自于 * 模板来自于 * A.1 缓冲蛋白胨水（BPW） A.1.1成分 蛋白胨10.0 g 氯化钠5.0 g 磷酸氢二钠（含12个结晶水）9.0 g 磷酸二氢钾1.5 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.2±0.2 A.1.2 制法 将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10 min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121 ℃，15 min。 A.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 A.2.1基础液 蛋白胨10.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化钠3.0 g、碳酸钙45.0 g、蒸馏水1 000 mL、pH 7.0±0.2 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20 min。 A.2.2硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含5个结晶水）50.0 g，馏水 加至100 mL，高压灭菌121 ℃，20 min。 A.2.3碘溶液 碘 片20.0 g、碘化钾25.0 g、蒸馏水 加至100 mL，将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。 A.2.4 0.5％煌绿水溶液 煌绿0.5 g、蒸馏水100 mL 溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。 A.2.5牛胆盐溶液 牛胆盐10.0 g，蒸馏水100 mL加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121 ℃，20 min。 A.2.6 制法 基础液900 mL、硫代硫酸钠溶液100 mL、碘溶液20.0 mL、煌绿水溶液2.0 mL 牛胆盐溶液50.0 mL 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。 A.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 A.3.1成分 蛋白胨5.0 g 乳糖4.0 g 磷酸氢二钠10.0 g 亚硒酸氢钠4.0 g L-胱氨酸0.01 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.0±0.2 A.3.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55 ℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液10 mL