微生物实验(生物实验三)资料.docVIP

生物大实验三《微生物学》部分实验目录 实验一、 实验六、 微生物的生理生化反应 实验七、 微生物菌种保藏 实验八、 沉淀反应 实验九、 细菌鞭毛染色及其运动的观察 实验十、 细菌芽孢、荚膜的染色及观察 实验一、 1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法3.进一步熟练掌握手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。 1.药品及试剂：KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，K2HPO4，1mol/L NaOH，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，马铃薯 2.仪器及其它 pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠、PH试纸 1.分组配制高氏一号培养基300ml。 可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.6 2.配制牛肉膏蛋白胨培养基 配方： 牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 水1000ml PH 7.4-7.6 3.配制马丁氏培养基 配方： K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 配制方法 配制20％马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml。80℃浸泡1h，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100Pa灭菌20min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 配制时，按每100ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 4.每组制备玻璃珠无菌水(45ml)三角瓶2个。 .每组制备无菌水试管(4.5ml/管)10支。 .每组包9cm培养皿24套，6套为一包。 .每组包1ml吸管5支，玻璃刮铲4个。 （一）培养基的制备与分装 1.称量 2.熔化 3.调pH 1mol/L NaOH调pH至7.4-7.6。 4.过滤 5.分装 1/4，固体分装装量不超过试管的1/5，分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3，灭菌后垂直待凝。 6.加棉塞 （二）无菌水的制备 7.用量筒量取45ml水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。 8.用5ml吸管取4.5ml水于试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。 9.培养皿的包装 6套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。 10.吸管的包装 11.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。 12.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，1.05kg/cm2121.3℃,20min湿热灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 13.灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。 14.将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48h，以检查灭菌是否彻底。 15.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？ 2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？ 3.干热灭菌应该注意哪些事项？ 4.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么 （一)实验目的 (1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。 (2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。 (3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。 （二） 水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。 水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每ml不超过100个。 所谓细菌总数是指1ml或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(ml)。它反映的是检样中活菌的数量。 所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。 水的大肠菌群数是指100ml水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。在正常