猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒混合感染的诊断与防制分析.docVIP

猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒2型和的 混合感染摘要:20年月某猪场发生体温升高为主要症状的疾病。头发病仔猪淋巴结、脾、肺脏组织用RT-PCR方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟毒为阳性结合本病的临床症状和病理剖检确诊为猪繁殖与呼吸综合征的混合感染。 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒混合感染诊断 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是世界范围内一种重要的猪传染病,特别自2006年“猪高热病”流行后变异是由普通猪繁殖与呼吸综合征病毒的NSP2段基因发生了缺失变异而来，其临床症状主要是出现三高一低即高热（40 ℃以上）、高发病率、高死亡率、低治愈率；猪群出现皮肤发红，个别有神经症状，能导致母猪流产甚至死亡，给养猪业的发展带来重创感染是威胁当前世界养猪业的一个重要疾病1991 年PMWS 首次在加拿大被发现目前已证实呈世界性流行。PCV2 感染引起的相关疾病在我国的流行情况也十分严重 给养猪业造成巨大的经济损失[]。我国学者在我国许多地方都分离出了这种病毒,且和其他病毒混合感染的情况日益明显PCV-2感染病例在临床上经常可见猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高致死性、烈性传染病近几年随着规模化养猪业的发展,猪瘟的发生出现一些新特点,表现为发病年龄小、散发流行、混合感染以及非典型性或隐性等特点[]，这又给本病的防治带来了很大的困难。PRRSV、PCV-2混合感染[7]，PRRSV、CSFV混合感染[8]，CSFV、PCV2混合感染最为常见本试验应用RT-CR方法结合临床症状和病理剖检对猪场猪繁殖与呼吸综合征PCV2)，猪瘟病毒混合感染进行了确诊,从而为场防制本病提供依据1 材料与方法 1.1　病料来源　自的份发病猪和死亡猪的脏、脾脏、淋巴结等脏器冷冻运送-20℃保存备用。 1.2酶和其他试剂　PCR扩增试剂盒、饱和酚、Taq DNA聚合酶、dNTPs、EB、DEPC、DL2000 Marker，TaKaRa RNA PCRKit(AMV)Ver.3.0购自大连宝生物有限责任公司其他试剂均为分析纯试剂。 1.3　引物设计及合成 根据已发表的PCV-2核酸全序列合成了1对特异性的PCR引物:5′-CAGCAAGAAGAATGGAAGAAGCGGA-3′:下游引物:5′-CCAGGACTACAATATCCGTGTAACT-3′。扩增目的基因片段长为1057bp，GenBank 中公布的猪瘟病毒（CSFV），石门（shimen）株基因组，设计合成了1对CSFV特异性的 1.4　参照文献1.5　RNA的提取参照文献1.6　PRRSVRT-PCR反应　 反应体系25μLRnaseFree ddH2O 10.5μL，MgCL2(25mmol/L) 5μL，dNTPMixture：2.5μL，10×One Step RNA PCR buffer2.5μL，引物(20pmol/μL)F2923 0.5μLR3272 0.5μL，AMV Reverse Transcriptase XL 0.5μL，AMV-OptimizedTaq0. 5μL，Ranse Inhibitor0.5μL，模板2μL反应条件为50℃30 min，94℃2 min。94℃30 s，58℃30 s，72℃45 s，共40个循环72℃延长10 min 1.7　PCV-2PCR反应 按下列组成配制PCR反应液10×PCR Buffer 1.5μL，ddH2O 10.4μL，MgCL2(25 mmol/L)1.5μL，dNTPs(10 mmol /L)0.3μL，Taq DNA聚合酶0.2μL上下游引物(20μmol/L)各0.3μLDNA模板0.5μL共15μL。将上述反应液加入到PCR反应管中轻轻混匀PCR反应液10×PCR Buffer 1.5μL，ddH2O 10.4μL，MgCL2(25 mmol/L)1.5μL，dNTPs(10 mmol /L)0.3μL，Taq DNA聚合酶0.2μL上下游引物(20μmol/L)各0.3μLDNA模板0.5μL共15μL将上述反应液加入到PCR反应管中轻轻混匀反应条件94℃预变性12 min然后94℃45 s55℃45 s、72℃1 min，扩增35个循环最后72℃延伸10in。 1.9PCR产物鉴定　用1%琼脂糖凝胶电泳,紫外检测仪下观察结果以PCR产物中出现以PCR产物中出现 2 防制措施 2.1　对发病较重的猪及时淘汰，病死猪深埋处理。流产母猪，同窝发病仔猪进行隔离饲养观察。圈舍及用具彻底消毒。 2.2　对全群未发病猪用哈兽研牌猪瘟兔化弱毒疫苗（4000RID/头份）进行紧急免疫接种，剂量为2头份/头（配种至妊娠85天母猪不免）。 2.3　猪瘟疫苗免疫7天后全群未发