色谱学lecture教案解析.ppt

定性、定量方法 定性方法 利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） s b1 b2 b2 s b1 s b1 b2 点样 第一次展开 第二次展开 通过板上化学反应 反应后生成特征颜色的化合物 反应后生成复杂的混合物，根据生成物的“指纹”特征加以鉴定。 可用于定性的板上反应有：乙酰化、浓硫酸脱水、偶氮化、酯化、卤化、酸碱水解、硝化、氧化还原、热解和光化学反应等。通过加热、喷雾等方法施加反应试剂。 通过板上光谱图定性 直接测定薄层板上斑点的紫外或可见吸收光谱图，与平行点加的标准斑点的图谱对照。 可建立标准条件下的化合物的光谱图库，用计算机检索定性。 与其他技术连用 TLC-付里叶变换IR联用 TLC-MS联用 定量方法 间接定量——将薄层分离后物质斑点定量地洗脱下来，再对洗脱液定量。 分光光度法、HPLC法、GC法、质谱法 直接定量 斑点面积测量——用透明纸覆盖在薄层表面，描出斑点界限，然后测量其面积。 目测法——比较系列标准与样品的斑点面积大小、颜色深浅，得到样品的含量范围。 薄层仪扫描定量 定量计算 归一化法、内标法、外标法 方法认证 选择性——以分离度表示，当待测组分的Rf值在0.3 – 0.7之间，扫描峰拖尾因子在0.9 – 1.1之间时可以接受的分离度为R大于等于1.0 稳定性——考察在采样、样品预处理、贮存、展开，展开后处理等过程中的样品稳定性。 线性与范围——相应于待测组分检出量的20% - 120%范围。 灵敏度——通常以标准曲线的斜率表示。 DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析 聚酰胺是—类化学纤维原料，即锦纶 (又称尼龙)。由己二酸与己二胺聚合 而成的称锦纶66 。 ??? 因为在这类物质分子中都含有大量酰胺 基团，故统称聚酰胺。 聚酰胺对很多极性物质有吸附作用，这是由于聚酰胺的一C＝O及NH基能与被分离物质之间形成氢键。如酚类(包括黄酮类、鞣质等)和酸类如核苷酸、氨基酸等)是以其羟基与酰胺键的羰基形成氢键；硝基化合物和醌类等物质与酰胺键的氨基形成氢键。被分离物质形成氢键能力的强弱，确定吸附能力的差异。在层析过程中，层层溶剂与被分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。因此选择适当的展层溶剂，使被分离物质在溶剂与聚酰胺表面之间的分配系数能有较大差异，经过吸附与解吸的展层过程，可以一一分离. DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析 二甲氨基萘磺酰氯 （1-Dimethylaminonaphtalene-5-sulfonyl chloride）简称DNS-Cl，可与氨基酸的游离氨基结合成DNS-氨基酸，形成的DNS-氨基酸在紫外线（260nm或365nm）照射下发出强烈的黄色荧光，因此可用荧光检测DNS-氨基酸的存在。反应过程如下： 荧光试剂：DNS-Cl二甲氨基萘磺酰氯 蛋白质、多肽、氨基酸可与其游离氨基结合， DNS-aa发出黄绿色荧光 DNS-Cl在pH过高时，水解产生 副产物DNS-OH，即： 在DNS-C1过量时，会产生DNS—NH2，即： DNS-氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光， 而DNS-OH和DNS-NH2产生蓝色荧光， 可彼此区分开。 临床生化上的应用 1.氨基酸的分离 2.核苷、核苷酸和核酸的分析 3. 蛋白类分子的分离与分析 小结 TLC-Essential-Oils The scan of TLC plate (silica gel G) with 10 essential oils developed with mobile phase toluene - ethyl acetate (93:7 v/v), next sprayed with vanillin in H2SO4 and heated. From left to right oils from: bergamot香柠檬, cedar雪松, eucalyptus桉树, syzygium, malaleuca, lavandula, mint,薄荷 orange, pine松木, spruce云杉. Identified components: B1 and L1 – linalol芳樟醇, B2 and L2 - linalyl acetate, E1 - cinneol,肉桂醇 G1 – eugenol丁子香醇, G2 - carryophyllene. Doubtfully identified components - C1 - cedrol, M3 - menthol, P1 – limonene柠檬油精. /wiki/File:TLC-Essential-Oils.jpg 薄层色谱法分离绿叶的提取物（如菠菜）的7个阶段 胡萝卜素洗脱的速